Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Разработка РДСК для диагностики бабезиоза собак

У нас уже 21989 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Разработка РДСК для диагностики бабезиоза собак

Количество страниц	117

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	24853.doc

Содержание	Содержание 1. Введение 4-9 2. Обзор литературы 2.1. Исторический обзор заболевания 10-15 2.2. Восприимчивость 15-21 2.3. Жизненный цикл ' 21-22 2.4. Патогенез 22-28 2.5. Исследование иммунитета 28-35 2.6. Серологические методы диагностики бабезиоза собак . 35-36 3. Собственные исследования 3.1. Материалы и методы 37-41 3.2. Результаты исследования 3.2.1. Выбор штамма возбудителя и определение его видовой принадлежности 42 - 46 3.2.2. Определение условий, влияющих на степень переболевания и выраженность паразитемии у зараженных бабезиозом собак 46-47 3.2.3. Опыты с неспленэктомированными собаками 47-49 3.2.4. Опыт со спленэктомированными щенятами 49 - 50 3.2.5. Опыт с подсосными 3-4 недельными щенками 50 - 52 3.2.6. Способ приготовления антигена для РДСК 52 - 53 3.2.7. Способ приготовления позитивной и негативной сыворотки для РДСК 3.2.7.1. Способ приготовления позитивной и негативной сывороток от собак " 54-56 3.2.7.2. Способ приготовления позитивной сыворотки от иммунизированных бабезийным антигеном кроликов 56-58 3.2.8. Сравнительное изучение активности нативных и высушенных антигенов, положительных и отрицательных сывороток в РДСК 59-65 3.2.9. Методика постановки РДСК 66-71 3.2.10. Динамика паразитемии и комплементсвязывающих антител у экспериментально зараженных бабезиозом собак 72 - 74 3.2.11. Результаты серологических исследований на бабезиоз собак из разных регионов России 74 — 81 4. Обсуждение 82 - 88 5. Выводы 88-89 6. Практические предложения 90 7. Список использованной литературы 91-107 8. Приложение 108-117 Введение 1.ВВЕДЕНИЕ. Общая характеристика работы 1.1. Актуальность проблемы. Бабезиоз - остро протекающее заболевание собак, вызванное паразитированием в эритроцитах животного простейших из отряда Piroplasmida, и сопровождающееся высокой температурой тела, угнетением, анемичностью и желтушности слизистых оболочек, гемоглобинурией, нарушением сердечной деятельности и нередко приводящим к летальному исходу. В настоящее время трудно представить себе жизнь человека без общения с четвероногими. Собака является слугой и другом, она преданный член семьи, компаньон в играх и помощник на охоте. Собака - помощник в повседневной жизни и спасатель в экстремальных ситуациях. Собака - символ статуса, престижа и моды. Собака служит в армии и милиции. О собаке говорят, что она создаёт комфорт и является близким товарищем. Собака - первое животное, одомашненное человеком, оно следует за ним по всему миру от Арктики до Антарктики. Приручив это животное, человек взял на себя обязанность заботы о его здоровье, охраны его от воздействия патогенных факторов. Бабезиоз - грозное заболевание, именуемое также пироплазмоз, характеризуется трансмиссивностью, природной очаговостью и проявляется лихорадкой непостоянного типа, глубокой анемией, кахексией (Davis J.W., Anderson R.C. 1971; Кровопаразитарные болезни животных. 1995; Jacobson L.S. et ah, 1996). В России переносчиками бабезиоза является клещ Dermacentor marginatus, а за рубежом отмечены клещи: Rhipicephalus sanguineus, Haemaphysalis Ieachi (Марков А.А. и др. 1935; Uilenberg G. et al., 1989; Hauschild S. et al.} 1995). Многими исследователями отмечена трансовариальная передача клещами возбудителя бабезиоза, а если учитывать, что восприимчивыми животными к заражению В.canis являются и дикие плотоядные семейства собачьих (Canis) (Велю Г. 1930; Якимов В.Л. 1931; Button С, 1979), то они, следовательно, могут служить и природными резервуарами (Henning M.W., 1956). Заболевание обладает ярко выраженной весенней и осенней сезонностью (Sanders D.A., 1937; Matthewman L.A. et al., 1993; Zahler M. et al. 1998; Sanders D.A. et al., 2002). Срок носительства после переболевания отмечен более 130 дней (Botros В.A.M. et al., 1975; Yonamine H. et al., 1984). . Заболевание широко распространено во всех регионах земного шара, чаще в тропической зоне (Марков А.А. и др, 1935; Uilenberg G. et al., 1989; Hauschild S. et al., 1995). Несмотря на профилактическую обработку против клещей, смертность остается значительной. Это обусловлено отсутствием надежной диагностики при массовом обследовании животных и выявлении природных очагов. Диагностика бабезиоза собак основана на учете эпизоотического состояния, сезона года, клинических признаков, патоморфологических изменений и результатов микроскопического исследования мазков крови. Решающими в диагнозе являются положительные результаты микроскопического исследования мазков крови. При окраске мазков крови по Романовскому-Гимза Babesia canis может иметь различную форму: грушевидную, овальную, округлую, амебовидную, но в основном находят парногрушевидную форму паразита (Паразитология и инвазионные заболевания с/х животных., 1956; Протозойные болезни с/х животных., 1982; Паразитология и инвазионные заболевания животных., 1998; Балагула Т.В., 2000. Walter S. et al., 2002;). Все формы могут различно ассоциироваться в одном эритроците (Якимов В.Л., 1931). Ограниченные возможности световой микроскопии сдерживают своевременное проведение лечебных и других мер борьбы с болезнью. Трудности в идентификации бабезий, и особенно при паразитоносительстве, вызвали необходимость изыскивать специфические и более эффективные средства диагностики, такие как серологические. Для предотвращения распространения бабезиоза необходима современная диагностика заболевания. Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности исследований по серологической диагностике бабезиоза собак. 1.2. Цель и задачи исследования: Учитывая необходимость своевременного выявления заболевания, основной целью работы явилось - усовершенствовать существующие методы диагностики, освоить и разработать производство новых, более чувствительных тест-систем. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи: - отработать оптимальные режимы для получения высокой паразитемии бабезий у неспленэктомированных и спленэктомированных щенят, щенят в подсосный период с целью использования высокоактивных антигенов в РДСК. установить периоды появления и исчезновения бабезийных антител у экспериментально зараженных щенят в РДСК. - провести выборочное серологическое исследование на бабезиоз собак в разных городах России. 1.3. Научная новизна Разработан метод приготовления высокоактивных антигенов для серологической диагностики бабезиоза собак, включающий получение высокой паразитемии у животных -доноров после спленэктомии. Впервые доказана возможность экспериментального заражения бабезиозом щенят в подсосный период. С помощью РДСК изучена динамика антителогенеза у экспериментально зараженных бабезиозом животных и уточнена эпизоотическая ситуация по бабезиозу собак в разных городах России. 1.4.Практическое значение работы Предложена и разработана методика получения бабезийного антигена B.canis для серологических реакций РДСК. Предложена комплексная схема получения позитивной и негативной сыворотки собак и её высушивания. Предложена схема получения антигена B.canis от экспериментально зараженных интактных щенят, от спленэктомированных и потом зараженных, и от щенят в подсосный период. По результатам проведенных исследований разработаны «Методические рекомендации по приготовлению и контролю антигенов из B.canis для РДСК», рассмотренные и утвержденные на заседании Ученого Совета ВИЭВ 10 августа 2004года. 1.5. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на: • И Московском международном ветеринарном конгрессе 17-19 апреля 2003 г. Москва. • «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине». 15-16 мая 2003 г. Москва. • Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 110-летию со дня рождения проф. А.А.Маркова. Москва 2002 г. • Заседание ученого совета ВИЭВ, Москва, 2003. • Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, Москва, 2005. 1.6. Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 работ в журналах «Ветеринарная медицина», «Ветеринарный консультант» и «Ветеринарная патология». 1.7. На защиту выносятся 1. Отработка оптимального режима получения высокой паразитемии бабезий у неспленэктомированных и спленэктомированных щенят, щенят в подсосный период с целью использования высокоактивных антигенов в РДСК. 2. Метод приготовления высокоактивных антигенов для серологической диагностики бабезиоза собак, включающий получение высокой паразитемии у животных - доноров после спленэктомии. 3. Материалы по заражению бабезиозом подсосных щенят. 4. Материалы по изучению периода появления и исчезновения комплементсвязывающих антител у экспериментально зараженных бабезиозом щенят. 5. получения Метод положительных сывороток крови от зараженных бабезиозом щенят и от паразитоносителей. 6. Метод получения положительной сыворотки от иммунизированных бабезийным антигеном кроликов. 7. Метод лиофилизации сывороток и антигенов. Материалы по их титрации. 8. Материалы по изучению динамики антителогенеза у экспериментально зараженных бабезиозом животных с помощью РДСК и уточнения эпизоотической ситуации по бабезиозу собак в разных городах Европейской части РФ. 9. Оптимизация режима постановки реакции длительного связывания комплемента для диагностики бабезиоза собак. 1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 142 наименования, из них 102 иностранных автора. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 5 рисунками. В приложении представлен документ, подтверждающий наиболее важный результат исследования и его практическую ценность. 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 2.1. ИСТОРИЧЕСКИЙ ОБЗОР. Бабезиоз собак - протозойное неконтагиозное трансмиссивное заболевание, вызванное инвазией и разрушением эритроцитов простейшим паразитом рода Babesia. Оно проявляется повышенной температурой, анемией, гемоглобинурией, поражением ЦНС (Davis J.W. and Anderson R.C., 1971; Zwart D. and Brocklesby D.W., 1979; Jacobson L.S and Clark I. 1994; Ятусевич А.И., Заблоцкии В.Т., 1995; Jacobson L.S. et al.., 1996.). Согласно Lounsbury (1902): стало известно от некоторых старых исследователей в провинции «Кап», что биллиарная лихорадка собак была известна ещё в середине XIX века в Южной Африке. Он предполагал также, что заболевание собак, описанное леди Anne Barnard в письме, датированном от 29 ноября 1779 года, было не иначе, как бабезиоз собак (Henning M.W., 1956). В 1895 году Piano и Galli-Valerio сообщили, что заболевание, известное, как желчная лихорадка или злокачественная желтуха охотничьих собак в Ломбардии (Италия), было обусловлено кровепаразитом, которому они дали название: bigeminum (вариант canis), позднее он был назван Piroplasma canis (Sanders D.A., 1937; Henning M.W., 1956). Название Pyrosoma возбудитель получил по характерному грушевидному виду (pirum - rpyina)(Walter S. et al., 2002). Hutcheon (1896) считал заболевание самостоятельным, хотя первоначально болезнь рассматривалась как биллиарная форма (billiary form) чумы собак (Henning M.W., 1956). В 1899 году он описал подобное заболевание в Южной Африке (Якимов В.Л., 1931). Spreul (1899), установил трансмиссивный путь заражения, заразив подопытных собак небольшой дозой крови, взятой от больной собаки. Микроскопическое исследование проводил Purvis (Hutcheon, 1896), ю обнаруживший внутриэритроцитарных паразитов. Robertson (1901), подтвердил наблюдения Purvis и Spreul, констатируя, что внутриэритроцитарные паразиты наблюдались в каждом случае заболевания на четвёртый день после подкожного заражения, а кровь становится инвазионной на третий день. Lounsbury в 1901 году первым определил переносчика заболевания клеща Haemaphysalis leachi. После Theiler (1904, 1905) установил наличие преиммуниции у переболевших бабезиозом собак (Henning M.W., 1956). Nuttall и Graham-Smith (1909) считали, что B.canis не поражает лис (Canis vulpes) и шакалов (C.mesomelas) в Южной Африке, но Schoop и Dedie (1938) в серии опытов удалось заразить черно-бурых лис в Германии. Rau (1926) сообщил, что индийский шакал (C.aureus) восприимчив к паразиту и может служить ему природным резервуаром (Davis J.W. and Anderson R.C., 1971; Zwart D. and Brocklesby D.W., 1979; Horak I.G., 1995. Природу, морфологию, жизненный цикл паразита первыми начали изучать Nuttall (1904), Nuttall и Graham-Smith (1905, 1906, 1907, 1909). В 1908 году J. P. Mcllvaine и Е. F. McCampbell провели подробное исследование в области патогистологии экспериментального заражения паразитами, выделенными от больных щенков, свиней, коров, кроликов, собак, кошек, лошадей, крыс; разработали свою технику окраски мазков; оставили описание возбудителя (Mcllvane J.P. and McCampbell E.F., 1908). Другой возбудитель бабезиоза собак, Babesia gibsoni, наблюдался у собак и шакалов в Индии в 1910 году. Patton'OM 1909 году описан у охотничьих собак в Мадрасе и у шакалов (Canis aureus). Затем было доложено о заболевании у лис в Мали, у собак в Куала-Лумпуре, Малайзии, Египте (Botros B.A.M. et al., 1975; Zwart D. and Brocklesby D.W., 1979; Namicawa K. et al., 1988). В.Л.Якимов n в 1931 году относил возбудителя к роду Achromaticus, виду Achromaticus gibsoni Patton, 1910 (Якимов В.Л., 1931). В России возбудитель Babesia canis был обнаружен в 1909 году В.Л.Якимовым в Петербурге у собаки, привезённой с Северного Кавказа, и В.Л.Любинецким, наблюдавшим возбудителя в Киеве, затем было сообщение от А.И.Джунковского и К.К.Луса о возбудителе в Закавказье. Кроме них пироплазмоз в России исследовали: И.П.Оболдуев (1910), Дубицкий (1921), Орлов в Сибири (1926), Фролов в Казани, Виноградов в Саратове, Якимов, Арбузов и Самарцев в Уральске (1928, 1929) Белицер и Марков (1929) (Якимов В.Л., 1931; Казаков Н.А., 1982). Якимов (1926), в связи с открытием новых форм пироплазм, поместил Babesia canis в подрод Piroplasma на основании того, что паразит имеет размеры больше радиуса эритроцита (Марков А.А. и др. 1935). Заболевание широко распространено во всех регионах земного шара, но чаще в тропической зоне. В субтропиках и умеренном климате встречается реже (так было на 1937г). Переносчиком возбудителя является в Африке Haemaphysalis leachi, в Индии и Тунисе - Rhipicephalus sanguineus, во Франции -Dermacentor marginatus (Марков А.А. и др. 1935; Horak I.G. 1995; М.В.Крылов, 1996) В России переносчиком служит, по сообщениям Белицера и Маркова, клещ Dermacentor marginatus (Марков А.А. и др. 1935). Выводы А.А.Маркова о специфичности переносчика подтверждаются спустя 54 года данными Uilenberg G. et al., (1989) Hauschild S. et al. (1995) и Horak I.G.(1995) . Laveran и Nattan-Larrier 1913; Regendanz и Reichenow 1932; Reichenow 1935; Brumpt 1938, докладывали, что вирулентность В.canis проявляется значительными вариациями в различных ареалах распространения. Так штамм из одной зоны может вызвать 12 быстрое развитие клинических признаков и . смерть у восприимчивой собаки, в то время как штамм из другой зоны вызывает только относительно слабую реакцию, хотя паразиты морфологически схожи. Laveran и Nattan-Larrier 1913, обнаружили, что собаки, иммунизированные французским штаммом, восприимчивы к североамериканскому.' Исходя из этого, они заключали, что оба штамма могли быть рассмотрены как различные виды или варианты B.canis. Reichenow 1935, полагал, что морфологически схожие виды крупных собачьих пироплазм в реальности являются отдельными видами. Он предположил это на основе того, что один из природных штаммов B.canis, который переносится клещом Rhipicephalus sanguineus, не может переноситься клещом Dermacentor marginatus. В то же время штамм, который переносится D.marginatus, не может переноситься Rh.sanguineus. Reichenow отделил в ' 1935 году паразитов Rhipicephalus - transmitted как отдельный вид от Европейского штамма Dermacetor - transmitted. Он дал ему название Babesia vogeli. Это название было забыто и не употреблялось. Brumpt (1938), так же полагал, что штаммы пироплазм собак, имеют различия в антигенной структуре (Henning M.W., 1956; Uilenberg G. et al., 1989). Schetters Th. P. M. et. al. (1997), установили различия в этиологии и патогенезе заболеваний, вызываемых штаммами B.canis canis и B.canis rossi. Так экспериментальное заражение собак изолятами из разных географических зон показало, что европейский изолят, полученный из Франции, проявил скоротечно протекающую паразитемию, обычно ниже 1%, связанную со снижением количества эритроцитов и кровенаполнением паренхиматозных органов. Клинически заболевание коррелировало с воздействием на коагуляционную систему и могло привести к тромбоцитопении 13 (Moore DJ. and Williams M.C. 1979; Harley J.W. et al. 1988; Matthewman L.A. et al. 1993; Camacho A.T et al., 2001). Заражение собак штаммом южно-африканского происхождения вызывало высокую паразитемию (обычно много больше 1%), которая требовала химиотерапии. У этих животных клиническая симптоматика заболевания коррелировала с периферической паразитемией и гемолизом (Schetters Th. P. M. et. al., 1997). Taylor J.H. et al., (1993), обнаружили способность южно -африканских штаммов вызывать острый жизнено-угрожающий гемолиз и предполагали наличие энзима, способного расщеплять гемоглобин. В России известен лишь один возбудитель бабезиоза собак -B.canis (Ершов B.C., 1956; Дьяконов Л.П., 1972; Казаков Н.А. 1982; Крылов, 1996; Акбаев М.Ш., 1998) Помимо B.canis бабезиоз собак вызывают виды: B.gibsoni и B.vogeli (Ewing S.A., 1965; Zwart D. and Brocklesby D.W., 1979; Farwell G.F. et al. 1982 ; Yonamine H. et al., 1984; Namicawa K. et al., 1988; Yamane I., 1993; Крылов, 1996; Ниманд Х.Г. и Сутер П.Ф. 1998;). Поэтому нельзя исключать наличие смешанной инвазии B.canis и B.gibsoni (Zwart D. and Brocklesby D.W., 1979; Yamane L, 1993;БондаренкоМ., 1998). Довольно часто в научной литературе можно встретить сведения о том, что бабезиоз сопровождается лептоспирозом и гепатитом (Бондаренко М., 1998), эрлихиозом (Ehrlichia canis) (Matthewman L.A. et al. 1993), Dirofilaria immitis (Eaton P., 1934). По данным Р. Seneviratna (1965) из 132 обследованных им собак вторичные инфекции: 28 собак имели паразитарное заболевание, обусловленное Ancylostoma caninum, 15 имели подострые и хронические нефриты, 8 - филяриоз, 6 - лептоспироз, 15 собак имели другие инфекции (P. Seneviratna, 1965). 14 Итак, бабезиоз собак известен с конца позапрошлого века, подробно изучены патогенез заболевания, симптомокомплекс, сопутствующие заболевания, пути заражения, переносчики, хозяева паразита, его жизненный цикл, ареал распространения, вирулентность, морфологические формы, разработаны методы диагностики. В настоящее время определены род Babesia, виды B.canis, B.gibsoni, подвиды B.canis canis; B.canis vogeli; B.canis rossi. (Uilenberg G et al 1989, Reyers F. et al 1997, Zahler M. et al 1998, Walter S., et al 2002). Считается, что на территории России распространен лишь подвид B.canis canis, но этот вопрос остаётся открытым. 2.2. ВОСПРИИМЧИВОСТЬ. Исследования по восприимчивости животных к возбудителю бабезиоза собак, начались с момента обнаружения паразита. Spreul (1899), заразил восприимчивых собак небольшой дозой крови, взятой от больной собаки, таким образом он установил трансмиссивный путь заражения, а также то, что при внутривенном пути введения болезнь протекает гораздо тяжелее, чем при подкожном. Микроскопическое исследование проводил Purvis (Hutcheon, 1896), обнаруживший внутриэритроцитарных паразитов. Robertson (1901), подтвердил наблюдения Purvis и Spreul, констатируя, что внутриэритроцитарные паразиты наблюдались в каждом случае заболевания на четвёртый день после подкожного заражения, а кровь становится инвазионной на третий день. Восприимчивым животным к заражению B.canis является собака и дикие плотоядные семейства собачьих (Graham-Smith G.S., 1905; Велю Г., 1930; Якимов В.Л., 1931; Davis J.W. and Anderson R.S., 1971; Zwart D and Brocklesby D.W., 1979; Jacobson L.S. et al., 2000). 15 Maronpot R.R. и Guindi E. (1970), заразили выделенным от лис штаммом спленэктомированных щенят лис, шакалов, собак. Заражали внутривенно и внутрибрюшинно. По данным Yonamine H. et al.(1984), после внутривенного заражения 50 мл крови паразитемия наблюдается на 2.. .3 день. На восприимчивость большое влияние оказывает возраст собаки: достаточно «одной капли» вирулентной крови, что бы убить щенка в возрасте от 2 до 12 недель, тогда как для заражения взрослой собаки необходимо до 10 мл крови. При острой форме смерть наступает в среднем через три дня; очень молодые щенки погибали иногда в 36...40 часов. Harvey J.W. et al. (1988), отмечает, что эритроциты больных щенков представляют собой гипохромные макроциты. Пораженные паразитом эритроциты образовывали агрегаты из двух-трех клеток. У кормящей суки не были обнаружены паразиты в крови, но она была сероположительна (метод непрямой иммунофлюоресценции выявил титр антител к паразитарному антигену - 1:640). Исследования Bobade P.A. et al., (1989) методом ELISA сывороток крови щенков - сосунков, показали у них наличие титра антител к паразиту B.canis. На основе того, что у одно-двух месячных щенков титр антител был выше (1:80... 1:160), чем у щенков в возрасте 2...6 месяцев (менее 1:40... 1:80), авторы предполагают наличие колострального иммунитета (Bobade P.A. et al., 1989). Удаление селезёнки приводит к снижению толерантности организма к паразитарным и инфекционным заболеваниям. Camacho А.Т. et al. (2001), сообщает о случае, когда, спленэктомированный по жизненно важным показаниям, фокстерьер в возрасте 3-лет пал от острого бабезиоза в течение 48 часов, несмотря на предпринятое лечение. 16 Развернутое исследование восприимчивости к заболеванию при экспериментальном заражении сделали Botros A.M. et al. (1975). По их данным средний препатентный период у спленэктомированных собак составлял 3,3 дня (от 1 до 12 дней), у интактных 4 дня (от 2 до 6 дней). Продолжительность паразитемии спленэктомированных собак - 13 дней (от 4 до 23 дней). В общем, возбудитель бабезиоза более патогенен для молодых спленэктомированных собак (в возрасте 3...6 мес), чем для более старших спленэктомированных собак (6...30 мес). Из 13 интактных собак: у 4 собак (12...30 мес.) заболевание не развилось, пять собак (6... 12 месячного возраста) переболели и две из них умерли на 8 и 32 день после начала паразитемии, 4 собаки (3...6 месячного возраста) после переболевания выздоровели (Botros A.M. et al., 1975). Молодые собаки чаще переболевают острой формой, тогда как старые - хронической (Велю Г., 1930). F.Reyers et. al. (1998), предполагают, что молодые собаки чаще страдают от тяжелой гемолитической анемии (возможно аутоиммунной) с последующим гипоксическим поражением печени, тогда как у старых собак развивался острый, повреждающий (альтеративный) воспалительный ответ. Кроме того, острый воспалительный ответ наблюдался чаще у собак бойцовых пород (F.Reyers et. al., 1998). Piercy S.E. (1947), наблюдал сверхострый случай бабезиоза у 6-ти месячного щенка. Диагноз поставили на основании обнаружения в мазках, окрашенных по Гимза, паразита B.canis (паразитов содержали 22% эритроцитов). Такой случай характеризовался внезапной смертью и отсутствием симптомов заболевания. Посмертное вскрытие не показало характерных для

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	24853.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

03.11.24 Лексикографический анализ единиц поля

03.11.24 Из истории слова гость и его производных

03.11.24 Семантическое поле гость в русском языке

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2024. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.