У нас уже 21989 рефератов, курсовых и дипломных работ
Заказать диплом, курсовую, диссертацию


Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Понравилось
Не понравилось





Книга жалоб
и предложений

 





Название Течение реовируснозо теносиновита кур в ассоциации с кокковыми инфекциями
Количество страниц 110
ВУЗ МГИУ
Год сдачи 2010
Бесплатно Скачать 24372.doc 
Содержание Содержание
ОГЛАВЛЕНИЕ

1 Введение...- 4 -

2 Обзор литературы...- 8 -

2.1 Реовирусная инфекция птиц и причиняемый ею экономический ущерб...- 8 -

2.2 Эпизоотологические данные...- 9 -

2.3 Характеристика реовирусов птиц...- 12 -

2.4 Патогенез реовирусного теносиновита птиц...- 17 -

2.5 Клинические и патологоанатомические признаки при реовирусном теносиновите и его ассоциированном течении...- 24 -

2.6 Феномены, возникающие при взаимодействии микроорганизмов...- 28 -

2.7 Диагностика реовирусного теносиновита...- 30 -

2.8 Профилактика заболевания...- 32 -

3 Собственные исследования...- 36 -

3.1 Материалы и методы...- 36 -

3.2 Данные эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств...-45-

3.3 Экспериментальная реовирусная моноинфекция...- 53 -

3.3.1 Патогенность реовируса для куриных эмбрионов...- 54 -

3.3.2 Способность реовируса птиц к репродукции в культуре клеток куриных эмбрионов...-60-

3.3.3 Патогенность реовируса для суточных цыплят...- 64 -

3.4 Изучение ассоциированного течения реовирусной и стафилококковой инфекций...- 66 -

3.4.1 Влияние стафилококка на репродукцию реовируса теносиновита в куриных эмбрионах...- 66 -

3.4.2 Взаимодействие стафилококка и реовируса в культуре клеток куриных эмбрионов...- 78-

-2-3.4.3 Влияние кокковой инфекции на течение реовирусного

теносиновита у цыплят...- 85 -

3.5 Изучение влияния сопутствующих кокковых инфекций на формирование и напряженность поствакцинального иммунитета к реовирусному теносиновиту кур...- 97 -

4 Обсуждение полученных результатов...- 101 -

5 Выводы...- 107 -

6 Список литературы...- 110 -

Введение



СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Ig—иммуноглобулин

ИФА - иммуноферментный анализ

КК — культура клеток

КЭ - куриные эмбрионы

МПА — мясо-пептонный агар

МПБ - мясо-пептонный бульон

МФА - метод флуоресцирующих антител

п.и. — после инокуляции

11113 - племптицезавод

РВП — реовирус птиц

РВТ — реовирусный теносиновит

РДП - реакция диффузионной преципитации

РН—реакция нейтрализации

РНК - рибонуклеиновая кислота

СПФ - свободный от патогенных факторов

ТЦД — тканевая цитопатическая доза

ФЭК - фибробласты эмбрионов кур

ФЭЧ — фибробласты эмбриона человека

ХАО - хориоаллантоисная оболочка

ЦПД — цитопатогенное действие

ЭИД - эмбриональная инфицирующая доза

ЭЛД - эмбриональная летальная доза

-4-

1. Введение

Актуальность темы

В последнее время проблема смешанных инфекций (син.: ассоциированные инфекции, сателлитные инфекции, микстинфекции (48)) в промышленном птицеводстве приобретает чрезвычайную актуальность в связи с возрастающей частотой выявления такой формы патологии. Особое значение имеет эта проблема при заболеваниях опорно-двигательного аппарата птиц.

Выраженная полиэтиологичность, широко распространенная одновременная циркуляция возбудителей вирусной и бактериальной природы и их накопление во внешней среде, высокая концентрация птицы на ограниченной территории и конвейерная технология производства закономерно приводят к возникновению новых взаимоотношений между макро- и микроорганизмами, а также способствуют естественному пассированию микроорганизмов и усилению их патогенных свойств. Все вышеперечисленное создает весьма благоприятные условия для возникновения ассоциированного инфицирования организма птицы (56,11).

Серологические и вирусологические исследования, проведенные во ВНИВИП, свидетельствуют о широком распространении реовирусной инфекции и ассоциированных форм ее течения у птиц разного возраста в хозяйствах РФ (39,54).

Смешанные реовирусно-бактериальные инфекции наносят существенный экономический ущерб промышленному птицеводству, затрудняют постановку диагноза и снижают эффективность проведенных противоэпизоотических мероприятий. В связи с этим, изучение особенностей проявления реовирусной инфекции в ассоциации с бактериями является весьма актуальным вопросом.

В современной литературе имеется большое количество сообщений, что инфекционными агентами, выделенными из пораженных суставов, являются как реовирусы (45), так и микроорганизмы бактериальной природы: стафилококки

-5-(10, 96), микоплазмы (41), кишечная палочка. Однако изучение взаимодействия

этих возбудителей и вызываемые ими патологические процессы в организме птиц при ассоциированном течении не описаны.

Таким образом, при смешанных инфекциях возникает целый ряд феноменов (215). Некоторые из них, такие как интерференция и иммунодепрессия широко освещаются в литературе, другие требуют детального изучения.

Цели и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось изучение особенностей проявления и течения реовирусно-стафилококковой инфекции. Для её достижения были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию в некоторых птицеводческих хозяйствах Российской Федерации по реовирусной инфекции;

2. Изучить взаимодействие реовируса птиц и стафилококка (Staphylococcus aurens) в развивающихся куриных эмбрионах;

3. Изучить влияние стафилококка на репродукцию реовируса в культуре клеток;

4. Изучить влияние стафилококка на развитие и течение реовирусной инфекции у цыплят;

5. Разработать «Рекомендации по диагностике и профилактике реовирусной инфекции птиц».

Научная новизна

Проведен эпизоотологический мониторинг по реовирусному теносиновиту на трех птицефабриках и установлено, что болезнь часто протекает в ассоциации с другими инфекциями.

Впервые в экспериментальных условиях воспроизведена смешанная реовирусно-бактериальная инфекция на различных биологических моделях. Изучена клинико-патоморфологическая картина проявления ассоциированной реовирусно-бактериальной инфекции в развивающихся куриных эмбрионах и на

-6-цыплятах различных возрастных групп, а также влияние стафилококка на

репродукцию реовируса в культуре клеток. Показано различие биологических особенностей штаммов реовируса птиц.

Впервые изучены особенности формирования иммунитета при реовирусном теносиновите у цыплят в условиях смешанной инфекции.

Практическая значимость работы

Показано широкое распространение реовирусной инфекции, особенности её ассоциированного течения в условиях птицехозяйств Российской Федерации.

Доказана этиология заболевания с поражениями в области головы у кур. В эксперименте на суточных цыплятах воспроизведена реовирусная инфекция с синдромом малабсорбции и задержкой роста.

Установлено иммуносупрессивное влияние стафилококка на формирование и напряженность иммунитета против реовирусного теносиновита в экспериментальных и производственных условиях.

На основании проведенных исследований разработаны «Рекомендации по диагностике и профилактике реовирусной инфекции птиц» и составлен информационный обзор на тему: «Болезни опорно-двигательной системы у птиц».

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на методических советах отдела вирусологии и опухолевых болезней птиц ВНИВИП (2002-2004), на юбилейной Международной конференции, посвященной 300-летию г. Санкт-Петербурга (17-19.06.03), международной научно-практической конференции «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных» (г. Минск, 23-24.10.03) и международной юбилейной научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» (г. С-Петербург-

-7-Ломоносов, 14-16.09.04).

Публикации

По теме диссертации опубликовано десять научных статей. Публикацию работ проводили в журналах «Животноводство России», «Вестник Россельхозакадемии», «РацВетИнформ», материалах Международных и Юбилейных конференций.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту

• Результаты эпизоотологического обследования птицехозяйств на реовирусную инфекцию;

• Взаимодействие реовируса и стафилококка (Staphylococcus aureus) в развивающихся куриных эмбрионах;

• Влияние стафилококка на репродукцию реовируса птиц в культуре клеток куриных фибробластов;

• Влияние стафилококка на течение реовирусного теносиновита у цыплят;

• Формирование иммунитета против реовирусного теносиновита при смешанной реовирусно-бактериальной инфекции.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 6 диаграммами и 37 рисунками (фотографиями). Список литературы включает 244 источника, из которых 181 зарубежный.

-8-

2 Обзор литературы

2.1 Реовирусная инфекция птиц и причиняемый ею экономический

ущерб.

Впервые реовирусы были признаны патогенными для птиц в 1957 году. Характерные клинические признаки, наблюдаемые у цыплят, позволили назвать это заболевание вирусным артритом (171, 234). С тех пор большинство исследователей считают реовирусы причиной различных заболеваний, включающих синдромы карликовости и задержки роста (182), малабсорбции (146), ломкой кости, некроза головки бедренной кости (203, 230), перикардитов, миокардитов, гидроперикардита (138), гастроэнтеритов (193, 194), гепатитов, острых и хронических дыхательных синдромов (98), панкреатитов (222), атрофии фабрициевой сумки и тимуса у кур (78), а также инфекционного энтерита индеек (145,240). Исследования, проведенные учеными по всему миру, показали присутствие реовирусов в большинстве различных популяций, как домашней (15, 19, 102, 56, 178), так и дикой птицы (157,159). Вирусы этого рода присутствуют в организме и здоровых птиц (187, 219), не индуцируя каких-либо поражений, или вызывая латентные инфекции (188) и проявляя иммуносупрессивную активность (110, 196). Вероятно, именно способность реовирусов подавлять иммунную систему птиц (196) обуславливает частую ассоциацию этой инфекции с секундарными, а также понижение резистентности к различным неблагоприятным факторам окружающей среды ( 88).

У цыплят реовирусы птиц являются признанным этиологическим фактором артритов и теносиновитов (тендосиновитов, синовитов) (24, 109, 130, 229). Данное заболевание характеризуется хромотой, связанной с воспалением сухожилий и синовиальных оболочек, а в запущенных случаях сопровождается разрывом сухожилия голени (124,123) и эрозией суставов (172).

При исследовании патологических состояний у птиц, связанных с реовирусом, неоднократно отмечали ассоциацию этой инфекции с другими

-9-

возбудителями и различными факторами окружающей среды (кормовые, условия содержания и др.) (33).

В настоящее время реовирусная инфекция причиняет значительный экономический ущерб промышленному птицеводству во всем мире. Убытки складываются из:

• прямых потерь в результате заболевания (повышение смертности в стаде до 10-15%, выбраковка из-за хромоты, снижение либидо у производителей, ухудшение усваиваемости кормов и уменьшение товарности тушек (211));

• косвенных потерь, связанных с затратами на снижение и ликвидацию последствий первичных потерь, а также с иммуносупрессивным действием реовируса, способствующего появлению вторичной инфекции и препятствующего, в некоторых случаях, формированию поствакцинального иммунитета (12,196).

2.2 Эпизоотологи ческие данные

В связи с широким распространением реовирусов в природе и присутствием их даже у клинически здоровых птиц, случаи заболеваний, вызванных данным возбудителем, регистрируют по всему миру.

Так, ещё в 70-х годах исследователи сообщали о появлении вирусного теносиновита в различных штатах США (172, 226, 227), а впоследствии в Канаде (122), Шотландии (155), Великобритании (82), Японии, Австралии, Италии (74) и других странах Европы (225, 81), Азии (150), Среднего Востока и Латинской Америки. В России реовирусы впервые выделены от гусей Контримавичус Л.М. (32) и от индеек Германом В.В. (14, 15) которые изучили их биологические свойства и осуществили идентификацию возбудителя (22).

Заболевание протекает в виде энзоотических вспышек, особенно среди вновь завозимого поголовья. Источником инфекции являются больные и переболевшие особи, дикая птица, помет, оборудование и инструменты, бывшие в контакте с больной птицей (228, 241). Возбудитель длительное время циркулирует в стадах неблагополучного хозяйства. Особую опасность в его

-10-распространении представляют отходы инкубации. Отмечается длительное

вирусоносительство, вирус удавалось выделить от птиц даже через 289 суток после экспериментального заражения (50).

До середины 90-х годов, реовирусы птиц рассматривали, в основном, как возбудителей кишечных заболеваний и считали, что фекально-оральное распространение — главный путь передачи, в то время как трансовариальная передача вируса вызывает низкий процент поражений. Большинство исследователей полагало, что все штаммы реовирусов птиц являются трипсин -нечувствительными и поэтому хорошо приспособлены к выживанию в жестких условиях желудочно-кишечного тракта (64). Однако в последнее время было доказано, что некоторые реовирусы птиц чувствительны к трипсину и поэтому выживают в кишечнике очень недолго. Исследования в этом направлении показали, что устойчивость к трипсину не является общим признаком. Действительно, у 7 из 21 штамма, включая вакцинные штаммы, была обнаружена чувствительность (208).

Феномен чувствительности/нечувствительности к трипсину, который предполагает различный патогенез инфекции и возможно альтернативные пути распространения чувствительных штаммов требует дальнейшего углубленного изучения (66).

На сегодняшний день, в значительной степени очевидно, что реовирусная инфекция передаётся как вертикальным, так и контактным путем. Хотя, степень трансовариальной передачи реовирусов у кур в естественных условиях значительно ниже (65). Исследования в Великобритании привели к гипотезе, что вертикальная передача реовируса приводит к чрезмерной карликовости, а горизонтальное заражение от врожденно инфицированных цыплят - к временной задержке роста у молодняка. Куры-несушки начинают нести контаминированные яйца уже через 15-19 дней после заражения. При оценке показателей стада также отмечено, что степень распространения возбудителя у бройлеров связана с возрастом родительского стада.

-11-Восприимчивость птиц к реовирусу зависит от многих факторов: возраста,

породы и пола птицы, вирулентности возбудителя, а также условий кормления, ухода, содержания и других факторов. К примеру, вирусный артрит, вызванный реовирусом, чаще отмечают у мужских, чем у женских особей.

Птицы проявляют также возрастную устойчивость к заражению реовирусом. Первая неделя жизни цыплят является наиболее критической, т.е. возможны обе потенциальные опасности: развитие латентно-персистирующего заболевания и падёж. Другими словами, инфицирование в однодневном возрасте может привести к развитию вирусного артрита (теносиновита), в двухнедельном возрасте - к временному воспалению, поражению меньшего количества тканей и отсутствию микроскопических изменений (за исключением инфицированных икроножных сухожилий), а в четырехнедельном возрасте - реовирус просто персистирует в организме птицы. Значительно менее восприимчивы цыплята старших возрастов.

Болезни, вызванные реовирусами, отмечают у тяжелых (мясных и их гибридов) и легких пород цыплят. Бройлеры более восприимчивы к поражению сухожилий и суставов, что вероятно, обусловлено двумя причинами (68):

1. Мясная птица быстро растёт, и это приводит к физическим изменениям несущих сухожилий ног, что может предрасполагать птиц к инфекции. Сухожилия конечностей у бройлеров также менее прочны при растяжении и имеют структуру строения, благоприятную для репродукции возбудителя инфекции.

2. Согласно серологическим тестам, иммунная система бройлерных цыплят приблизительно на одну неделю длительнее реагирует на реовирусную инфекцию, что, возможно, способствует большей восприимчивости мясных кроссов по сравнению с более легкими породами птиц (135).

-12-23 Характеристика реовирусов птиц

Реовирусы являются двуспиральными РНК-содержащими вирусами, т.е. их геном состоит из двойной нити РНК (202). Они устойчивы к физической (171) и химической инактивации, а также к низкому значению рН и воздействию многих дезинфектантов (87, 214). Эти вирусы очень похожи на вирус инфекционной бурсальной болезни и аналогично стойки ко многим обычным дезинфицирующим средствам. Реовирусы остаются способными к заражению в окружающей среде в течение длительного периода времени. В культуре клеток реовирусы не теряли своей инфекционной активности в течение года при температуре хранения в 22°С. При культивировании вируса пассажами через две недели влияние на популяцию реовируса минимально. Исследование степени выживаемости реовирусов на различных материалах, встречающихся в птицеводческих помещениях, показали, что эти вирусы оставались жизнеспособными длительное время, не снижая своей патогенности (197). Таксономическое положение

Согласно последним рекомендациям Международного Комитета по таксономии вирусов (Sixth ICTV Report) реовирусы птиц (Avian orthoreoviruses, VC 60.0.1.2) относятся к роду Orthoreovirus (VC 60.0.1.) семейства Reoviridae

(VC6O).

Штаммы реовирусов птиц имеют группоспецифические антигены и

серологически являются отдаленно родственными серотипам млекопитающих (181). Имеется также вирус Nelson Bay, имеющий промежуточные свойства между ортореовирусами птиц и млекопитающих. Реовирусы птиц отличаются от реовирусов млекопитающих по некоторым биологическим свойствам (190). Они вызывают образование синцития в культуре клеток (209), не обладают гемагглютинирующей активностью (137, 136) и не способны к репликации в культуре клеток млекопитающих (13,109,213).

-13-В Японии в 1966 году изолировали 77 штаммов реовирусов птиц и в

перекрестных реакциях нейтрализации, связывания комплимента и преципитации в геле (136) подразделили их на пять серотипов, а в США в 1975 году девять изолированных видов - в четыре различных серотипа. В 1980 году в Великобритании, Германии и США были выделены еще пять видов реовирусов, отличающихся от существующего вакцинного штамма - S1133, которые были классифицированы на три серотипа. Когда каждый прототип от этих трех серотипов (1980) был сравнен с пятью Японскими серотипами (1966) и четырьмя серотипами из США (1975), было сделано заключение, что имеются, по крайней мере, 11 серотипов (86). В итоге изолированы сотни штаммов реовирусов и поэтому весьма затруднительно сгруппировать их в отличные категории серотипов (127, 167,185,238).

Однако, в настоящее время Международным Комитетом по Таксономии Вирусов (англ. ICTV) принята следующая таксономическая структура серогрупп реовирусов птиц (по данным на 28 Июня 2002 года): Тип рода: 60.0.1.1.001 reovirus 3. Виды: 60.0.1.2.002 avian reovirus I (Uchida, TS-17); 60.0.1.2.003 avian reovirus 2 (TS-17); 60.0.1.2.004 avian reovirus 3 (TS-142); 60.0.1.2.005 avian reovirus 4 (CS-108); 60.0.1.2.006 avian reovirus 5 (OS-161); 60.0.1.2.007 avian reoviras 6 (R24); 60.0.1.2.008 avian reovirus 7 (R25); 60.0.1.2.009 avian reovirus 8 (Fahey-Crawley); 60.0.1.2.010 avian reovirus 9 (59); 60.0.1.2.011 Nelson Bay virus; 60.0.1.2.012 Somerville virus 4; 60.0.1.2.013 no 60.0.1.2.154 WVU virus 71 до 212; 60.0.1.2Л55 WVU virus 2937.

-14-При этом штаммы реовируса, которые являются достоверно различными

друг от друга в условиях классификации (гетерологичные штаммы) показывают значительную перекрестную реакцию. Ввиду этой гомологичности, вакцина из штамма SH33 реовируса обеспечивает защиту от многих других штаммов этого вируса. Это в такой же мере относится и к штаммам, используемым в инактивированных вакцинах против реовирусной инфекции птиц (44). Морфология вириона

Диаметр вириона составляет 80-82 нм. Вирионы реовируса имеют изометрический тип симметрии и состоят из двух различных морфологических элементов: наружной капсидной оболочки и внутреннего ядра. Вирусные РНК-сегменты находятся внутри ядра. Из вирионов выделены восемь белков. С вирусными частицами связано несколько ферментов. Они включают: РНК-независимую РНК полимеразу, гуанилил-трансферазу и метилтрансферазу, каждая из которых связана с синтезом РНК и пост-транскрипциональной модификацией (99). Однако пока не выяснено, как сегменты вирусной РНК расположены в вирусных частицах (235).

Рисунок 1. Негативно окрашенный реовирус птиц из экстракта помета

Ясно различим 2-уровневый калсид. Полоса = 100 нм. Негативное контраста] Микрография выполнена на электронном микроскопе Siemens 102, при 100kV.

-15-

Вирионы не имеют внешней оболочки и представлены только одним типом частиц. Капсидная оболочка состоит из двух слоев (рисЛ). Слои капсидной оболочки вириона присутствуют обычно полностью или в отдельных случаях, наружная потеряна. Нуклеокапсиды имеют упорядоченную поверхностную структуру и диаметр 70-80 нм. Данный структурный элемент имеет симметрию икосаэдрального типа и поэтому нуклеокапсиды кажутся круглыми. Часто встречаются неполные вирусные частицы, они представляют собой пустые или неполностью собранные капсиды.

Исследователи из Гарвардского Университета (184), с помощью метода рентгеновской кристаллографии установили трехмерную структуру ядра. Поскольку атомная структура каждого вещества уникальна, картина дифракции рентгеновских лучей является специфичной. Интерпретация таких изображений, полученных при облучении белковых кристаллов, дает представление о трехмерном строении их молекулы. Нобелевские лауреаты Дж. Кендрью и М. Перутц разработали методы рентгеновской кристаллографии, позволяющие исследовать структуру белка с разрешением 2А и установить последовательность отдельных аминокислот.

Ядро реовируса (рис.2) - это внутренний компонент вируса, который остается без изменений, даже после того как он проникнет в клетку-хозяина. Ядро непосредственно участвует в синтезе, модификации и транспорте вирусной РНК-матрицы (мРНК), которая несет информацию к рибосоме клетки-хозяина (89), где и формируются специфические вирусные белки, завершая, таким образом, процесс контроля вирусной частицей клетки-хозяина. Ядро содержит пять из восьми белков, которые составляют полный вирион, и имеет размер -приблизительно 700 А в диаметре. Reinish et al. (2000) показали, что ядро полностью включает вирусный геном и формирует молекулу РНК таким образом, что она может быть легко транскрибирована во многие копии (184).

-16-

Рисунок 2. Схема строения ядра реовируса

Частицы ядра реовируса показаны как субъединицы в различных цветах. Имеются 120 повторяющихся частей (в красном), которые формируют раковину и, таким образом, упаковывают РНК. Эта часть определяет симметрию и размер частицы. Другие субъединицы (желтые, зеленые и белые) стабилизируют раковину. Синие части формируют башенно-подобные структуры вокруг пятикратных осей, через которые происходит экспорт зрелой мРНК в цитоплазму инфицированной клетки.

Вирион содержит 15-20% нуклеиновой кислоты и 80-85% белка. Геном состоит из мономера и содержит 10 сегментов линейной двуспиральной РНК. Общая длина генома составляет 23700 нуклеотидов. Наибольший размер имеет сегмент L1 3800-3900; второй по величине L2 , третий L3, четвертый Ml 2200-2300, пятый М2, шестой МЗ, седьмой S1 1200-1400, восьмой, девятый и десятый соответственно S2, S3, S4 1200-1400 (204, 198).

Репликация и транскрипция генетического материала

Транскрипция двуспиральных РНК вирусов определена как синтез новой позитивной спирали (нити) с шаблона двуспиральной РНК. Транскрипция и
Список литературы
Цена, в рублях:

(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)		 1425
Скачать бесплатно 24372.doc 





Найти готовую работу


ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:


Связаться

Доставка любой диссертации из России и Украины

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ


Ссылки:

Выполнение и продажа диссертаций, бесплатный каталог статей и авторефератов

Счетчики:

Besucherzahler
счетчик посещений

© 2006-2024. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.