Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Отруктурное изучение стеринов и некоторый сопутствующий токсинов морскик гуБок

У нас уже 21989 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Отруктурное изучение стеринов и некоторый сопутствующий токсинов морскик гуБок

Количество страниц	149

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	23317.doc

Содержание	Содержание 1. ВВЕДЕНИЕ...4 2. СТЕРИНЫ ГУБОК...8 2.1. Литературный обзор...8 2.1.1. Общие сведения о стеринах...8 2.1.2. Методы исследования стеринов...9 2.1.2.1. Хроматографическое выделение и разделение стеринов...9 2.1.2.2. Газо-жидкостная хроматография...9 2.1.2.3. Масс-спектрометрия...10 2.1.2.4. СпектроскопияЯМР'Н и 13С...11 2.1.3. Некоторые литературные данные о губках и их стеринах...12 2.2. Обсуждение результатов...14 2.2.1. Выделение фракций свободных стеринов губок и их разделение...14 2.2.2. Стерины трех губок рода Xestospongia (отряд Haplosclerida, семейство Petrosiidae)...15 2.2.3. Стерины и другие стероидные соединения пяти губок рода Haliclona (отряд Haplosclerida, семейство Chalinidae)...,. ..23 2.2.4. Стерины Callyspongia sp. (отряд Haplosclerida, семейство Callyspongiidae)...30 2.2.5. Стерины двух губок рода Amphimedon (отряд Haplosclerida, семейство Niphatidae)...31 2.2.6. Стерины семи губок рода Oceanapia (отряд Haplosclerida, семейство Phloeodictyidae)...33 2.2.7. Стерины Lissodendoryx behringi (отряд Poecilosclerida, семейство Coelosphaeridae)...39 2.2.8. Стерины Clathria major (отряд Poecilosclerida, семейство Microcionidae)...40 2.2.9. Стерины Monanchora clathrata (отряд Poecilosclerida, семейство Crambeidae)...41 2.2.10. Стерины двух образцов губки Geodinella robusta (отряд Astrophorida, семейство Geodiidae)...44 2.2.11. Стерины Erylus formosus (отряд Astrophorida, семейство Geodiidae)...45 2.2.12. Стерины Melophlus sarasinorum (отряд Astrophorida, семейство Ancorinidae)...46 2.2.13. Стерины Agelas mauritiana (отряд Agelasida, семейство Agelasiidae)...47 3 2.2.14. Стерины Darwinella australiensis (отряд Dendroceratida, семейство Darwinellidae)...49 2.2.15. Стерины Scalarispongia sp. (отряд Dictyoceratida, семейство Thorectidae)...51 2.2.16. Стерины губки Phakellia elegans (отряд Halichondrida, семейство Axinellidae)...51 2.2.17. Стерины губки Teichaxinella labirintica (отряд Halichondrida, семейство Axinellidae)...58 2.2.18. Стерины неидентифицированной губки сем. Axinellidae (отряд Halichondrida)...62 2.2.19. Стерины Didiscus aceratus (отряд Halichondrida, семейство Desmoxyidae)...63 2.2.20. Стерины Topsentia sp. (отряд Halichondrida, семейство Halichondriidae)...64 2.2.21. Стерины Axynissa aplysinoides (отряд Halichondrida, семейство Halichondriidae)...65 2.2.22. Стерины неидентифицированной известковой губки (класс Calcarea)...68 2.2.23. Некоторые заключения из сравнительного анализа стеринов изученных губок...69 2.3. О функциях стеринов губок...70 3. ТОКСИНЫ, СОПУТСТВУЮЩИЕ ИЗУЧЕННЫМ СТЕРИНАМ...74 3.1. Гемолитическая активность спиртовых экстрактов исследованных губок...74 3.2. Свободные жирные кислоты из Amphimedon sp. 1:...75 3.3. Сестертерпеноиды из губки Darwinella australiensis...78 3.4. Тритерпеновые гликозиды из губки Melophlus sarasinorum...87 3.5. Тритерпеновые гликозиды из губки Erylus formosus...99 3.6. 2,3-Секо-стероидные кислоты из губки Haliclona sp. 5...100 3.7. Дитерпеноиды с 9-метиладениновым фрагментом и бромсодержащий алкалоид из губки Agelas mauritiana...106 3.8. Биполярный сфингозиноподобный липид из губки Oceanapia sp. 1...110 3.9. Производное сесквитерпеноида из губки Axinyssa aplysinoides...Ill ЗЛО. Полициклический гуанидиновый алкалоид из губки Monanchora clathrata...Л13 3.11. Результаты параллельного исследования разных групп вторичных метаболитов губок...115 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ...119 5. ВЫВОДЫ...147 6. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ...149 ВВЕДЕНИЕ Губки (тип Porifera) принадлежат к одной из самых древних групп животных и имеют самый разнообразный набор стеринов среди представителей животного царства. Стерины губок включают как обычные для эукариотических организмов мембранные компоненты (холестерин и его распространенные производные), так и соединения с необычными структурными чертами, функциональная роль которых остается неясной [1-3]. Исследование функций необычных стеринов морских губок до сих пор является актуальным направлением в изучении этих соединений. Полученные ранее результаты параллельного изучения цитотоксичных вторичных метаболитов и стериновых фракций из одних и тех же морских беспозвоночных (голотурий, морских звезд, губок) позволили предположить, что, по крайней мере, в ряде случаев замена обычных стеринов на редкие представляет собой механизм защиты мембран токсин-продуцирующих видов от воздействия собственных токсинов. Наличие такой функциональной взаимосвязи («биохимической координации») в голотуриях и морских звездах между А7-стеринами и станолами, с одной стороны, и токсичными гликозидами, с другой стороны, было обосновано ранее [4]. Была высказана гипотеза, что и в губках наличие разных необычных стеринов может быть связано с присутствием различных сопутствующих мембранолитических токсинов [5, 6]. Мембранотропные вторичные метаболиты губок давно рассматриваются в качестве потенциальных лекарственных средств. Если механизм их цитотоксического воздействия связан со стериновыми составляющими мембран, то изучение стеринов соответствующих продуцентов перспективно с точки зрения создания комбинированных препаратов с пониженной токсичностью. Данная работа является первым систематическим изучением биохимической координации среди губок. Целью настоящего исследования являлись выделение, установление структуры свободных стеринов и сопутствующих им гемолитиков и цитотоксинов губок, а также выявление некоторых закономерностей совместного присутствия этих двух различных по своим биологическим функциям групп соединений (стеринов и токсинов) в организме животного. В дополнение к этому представляло интерес изучение распределения свободных стеринов в представителях различных таксонов Porifera, что могло дать новую хемотаксономическую информацию. В данной работе мембранолитическая активность этанольных экстрактов, фракций и индивидуальных соединений была определена на мышиных эритроцитах. Как известно, эритроциты животных имеют высокое содержание холестерина (25-30%) и являются традиционной моделью для изучения функционального состояния мембран. В случае гемолиза визуально наблюдается непосредственный результат действия различных веществ на мембрану эритроцитов. В качестве объектов исследования были выбраны тридцать пять образцов губок, относящихся, за исключением одной известковой губки (класс Calcarea) к классу Demospongiae. Мы изучили стерины данных беспозвоночных, а также гемолитическую активность этанольных экстрактов большинства губок. Этанольные экстракты из тридцати видов показали различную степень гемолитической активности, вплоть до ее отсутствия. Из экстрактов семи губок, показавших наибольшую активность, нами были выделены гемолитические агенты разной химической природы (жирные кислоты, терпеноиды, гликозиды, стероидные кислоты, алкалоиды). В диссертации использованы следующие сокращения: ТСХ — тонкослойная хроматография; ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография высокого давления; ГЖХ - газо-жидкостная хроматография; ОВУ -относительное время удерживания; СК ЯМР Н и 13С — спектроскопия ядерного магнитного резонанса на протонах и ядрах углерода; КССВ - константа спин-спинового взаимодействия; ХС - химический сдвиг; DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) - ЯМР-эксперимент с неискаженным усилением сигнала с помощью переноса поляризации с протона на ядро углерода; ID NOE (Nuclear Overhauser Effect) - одномерный ЯМР-эксперимент ядерного эффекта Оверхаузера; NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy) - спектроскопия ядерного эффекта Оверхаузера; COSY (Correlation Spectroscopy) - корреляционная спектроскопия; TOCSY (Total Correlation Spectroscopy) - полная корреляционная спектроскопия; HSQC (Heteronuclear Single Quantum Correlation) - ЯМР-эксперимент гетероядерной одноквантовой корреляции; НМВС (Heteronuclear Multiple-Bond Correlation) - ЯМР-эксперимент гетероядерной корреляции через несколько связей; МС - масс-спектрометрия; HRFABMS (High Resolution Fast Atom Bombardment Mass-spectrometry) — масс-спектрометрия высокого разрешения с ионизацией быстрыми атомами; MALDI-TOF (Matrix Assistant Laser Desorbtion/Ionization Time-of-Flight Mass-spectrometry) - масс-спектрометрия с матричной лазерной десорбцией/ионизацией; ГЖХ-МС - хромато-масс-спектрометрия; CAD (Collision Activation Dissociation) - вид масс-спектрометрии с диссоциацией, активированной столкновениями. Нам представлялось удобным использовать для стероидных соединений часто употребляемую для них нумерацию, при которой стероидные ядра обозначаются буквами, а боковые цепи - цифрами. Таким образом, каждому стерину (стероиду) дается обозначение, состоящее из одной буквы и одной цифры. Например, холестерин будет иметь при этом номер А4. Соединения нестероидного характера пронумерованы обычным способом. Ниже приводятся структуры и буквенные обозначения тетрациклических ядер стероидов (схема 1) и их боковых цепей (схема 2). Среди стероидов, представленных на схемах 1 и 2, присутствуют как соединения, идентифицированные в данной работе, так и те, которые упоминаются при обсуждении результатов. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю Макарьевой Т.Н., а также академику Стонику В.А. за чуткость и всяческую поддержку, к.х.н. Денисенко В.А., к.х.н. Дмитренку А.С, н.с. Дмитренку П.С., Моисеенко О.П., к.б.н. Прокофьевой Н.Г., к.х.н. Пономаренко Л.П. за съемку ЯМР- и масс-спектров, проведение биотестирования и ГЖХ-анализа, за абсолютно бескорыстную помощь в работе, ценные идеи и критические замечания 2. СТЕРИНЫ ГУБОК 2.1.1. Общие сведения о стеринах Стерины - один из классов стероидов. Стероидами называют соединения, молекулы которых содержат циклопентанпергидрофенантреновое ядро, обычно замещенное в положениях 10, 13 и 17. По химической структуре стерины являются одноатомными вторичными спиртами циклопентанпергидрофенантренового ряда с гидроксильной группой в положении 3, боковой цепью (обычно из 8-10 атомов углерода), присоединенной в положении 17, и с ангулярными метальными группами при С-10 и С-13. В животных наиболее широко распространен холестерин (А4). Характерной особенностью стеринов, в отличие от обычных спиртов, является их существование в кристаллическом виде (температуры плавления в пределах 100-200°С). Именно поэтому эти соединения получили общее название стеринов (греч. stereos — твердый). Все морские и наземные организмы, за исключением бактерий, содержат стерины. Вещества стериновой природы служат одним из структурных материалов, из которых состоят биологические мембраны. Другая важная функция стеринов заключается в том, что они являются исходным материалом для синтеза в живых организмах других\ жизненно важных стероидов (желчных кислот и спиртов, половых и кортикоидных гормонов, стероидных гликозидов, антибиотиков и т.д.). Некоторые стерины обладают провитаминной активностью. Так, 7-дегидрохолестерин и его гомологи относятся к предшественникам витаминов группы D. Окисление стеринов, ведущее к разнообразным физиологически активным соединениям и иногда, возможно, связанное с использованием стеринов в качестве источников энергии, - одно из важнейших направлений стероидного метаболизма в морских организмах. Образующиеся в результате окисления полигидроксилированные стерины могут явиться теми промежуточными соединениями, дальнейшее окисление которых приводит к разрыву стероидного ядра и образованию так называемых секо-стероидов [7]. Губки, которые стоят на низших ступенях эволюционного развития, содержат самый богатый набор стеринов по сравнению с другими организмами. Стерины являются наиболее распространенными стероидными метаболитами губок. Содержание их в этих беспозвоночных составляет 0,01-1,5% от сухого веса животного [8]. 2.1.2. Методы исследования стеринов 2.1.2.1. Хроматографическое выделение и разделение стеринов Следствием характерной биохимической особенности морских губок является выделение из них весьма сложных стериновых фракций, в которых нередко идентифицируют десятки компонентов, близких друг к другу по свойствам и хроматографическому поведению. Колоночная хроматография на силикагеле много лет остается основным способом получения очищенных стериновых фракций. Для дальнейшего разделения на подфракции используют хроматографию на сорбентах, импрегнированных нитратом серебра [9]. Этот метод основан на образовании комплексов между ионами серебра и двойной связью стеринов. Чем менее экранирована двойная связь, тем прочнее образующийся комплекс, и тем сильнее сорбируется соответствующий компонент. Сочетание адсорбционной и "аргентационной" хроматографии позволяет в некоторых случаях выделять индивидуальные стерины из стериновых фракций, компоненты которых отличаются друг от друга степенью ненасыщенности или положением кратных связей. Колоночная высокоэффективная жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) на прямой и обращенной фазах обычно применяется после хроматографии низкого давления на силикагеле. ВЭЖХ на прямой фазе позволяет разделить А0-, Д5- и Д7-стерины [10], а ВЭЖХ на обращенной фазе - стерины-гомологи и некоторые изомеры по положению двойных связей [11]. Выделение стеринов в индивидуальном состоянии достигается сочетанием разных типов хроматографирования. Часто стерины идентифицируют в стериновых смесях без их предварительного разделения, основываясь на данных ГЖХ (сравнивая ОВУ) и хромато-масс-спектрометрии (учитывая особенности фрагментации при МС электронного удара). 2.1.2.2. Газо-жидкостная хроматография Качественный и количественный анализы фракций стероидных спиртов обычно выполняют с помощью газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ). Анализ ведут на капиллярных колонках с SE-30, OV-101 и СВР-5 в качестве стационарных фаз. Известно, что удерживание молекулы на сорбенте зависит от ее структуры: количества атомов углерода, наличия и положения заместителей, кратных связей. Идентификация пиков на хроматограммах осуществляется сравнением времен удерживания анализируемых веществ с временами удерживания стандартных соединений. Удобнее сравнивать не абсолютные времена удерживания, а относительные (ОВУ), рассчитанные относительно стандарта (чаще всего холестерина), так как эта характеристика не зависит от условий анализа. 2.1.2.3. Масс-спектрометрия Однако даже такой мощный метод разделения, как ГЖХ, нередко не позволяет полностью идентифицировать сложные смеси стеринов из морских организмов. Поэтому широко применяют сочетание ГЖХ и масс-спектрометрии (хромато-масс-спектрометрию), что позволяет в процессе хроматографического разделения фракции получать масс-спектры ее компонентов. Наиболее часто для идентификации стеринов применяется масс-спектрометрия электронного удара. Основные закономерности фрагментации стероидных спиртов были установлены Джерасси [12], Вульфсоном и Заикиным [13] и другими. Масс-спектрометрия дает возможность подтвердить стероидную природу изучаемого соединения, установить наличие и положение кратных связей, а также алкильных заместителей в ядре или в боковой цепи. Наиболее характеристичные сигналы в масс-спектрах ацетатов стеринов приведены в таблице 1 (эти производные чаще используют для идентификации стеринов) [2]. Таблица 1. Характеристичные пики в масс-спектрах ацетатов некоторых стеринов (Д • тип ненасыщенности, R — боковая цепь в анализируемом соединении) А Характеристические сигналы, m/z А5 М+- АсОН; 255 (М4"- АсОН - R); 213 Д7 М+, М+- АсОН; 255; 213 Д° М+, М+- АсОН; 275; 257; 215 А5-22 М4"- АсОН; 282 (М4- АсОН - фрагмент R из-за разрыва С(20)-С(22)-связи); 255 (M+-R-АсОН); 213 Д7,22 М+, М+- АсОН; 342; 255; 229; 213 А22 М+; М+- АсОН; 344 (М+- фрагмент R из-за разрыва С(20)-С(22)-связи); 257 (М+- R - АсОН); 215 (М+- R - 42 - АсОН) д5,24(28) М+- АсОН; 296 (М+- фрагмент R из-за разрыва С(22)-С(23)-связи - АсОН); 255 (M+-R-АсОН); 213 д7,24(28) М+; М+- АсОН; 356 (М4"- фрагмент R из-за разрыва С(22)-С(23)-связи); 296 (М+- фрагмент R из-за разрыва С(20)-С(22)-связи - АсОН); 255; 228; 213 Д24(28) М4"; М+- АсОН; 358 (М+- фрагмент R из-за разрыва С(22)-С(23)); 215 2.1.2.4. Спектроскопия ЯМР Широкое использование в структурных исследованиях морских стеринов нашла ЯМР-спектроскопия, особенно на ядрах водорода. При изучении стероидов с помощью 'Н ЯМР-спектроскопии большое значение имеет анализ химических сдвигов (ХС) сигналов ангулярных метильных групп. Положение этих сигналов характеристично для различных типов ненасыщенности стероидного ядра (таблица 2). Таблица 2. Химические сдвиги СНз-18 и СНз-19 различных скелетных систем стеринов Тип ненасыщенности Химический сдвиг, м.д. (CDCb) Литературный источник СНз-18 СН3-19 Д5 0,68 1,01 [14] Д5,22 0,69-0,70 1,01 [14, 15] Д° 0,65 0,80 [14] д22 0,66 0,80 [14, 16] д7 0,54 0,81 [14,16] Д7,22 0,55 0,81 [16] Д5'7 0,63 0,94 [17] Положение сигнала СНз-18 зависит от строения боковой цепи сильнее, чем СНз-19. Например, у соединений Д5-ряда 5н СНз-18 находится в диапазоне 0,62-0,74 м.д. и может заметно сдвигаться в слабое поле у стеринов с двойной связью в боковой цепи по сравнению со стеринами с насыщенной боковой цепью [15]. Кроме того, определение точных значений ХС протонов других метильных групп дает возможность установить стереохимические особенности изучаемых соединений. Например, эпимерные по С-24 стерины часто идентифицируют в экстрактах морских организмов по их спектрам ЯМР. В тех случаях, когда оба эпимера присутствуют в экстракте, их разделение хроматографическими методами выполнить, как правило, не удается. Если же в природной смеси имеется только один из эпимеров, то его стереохимическая идентификация затруднена из-за отсутствия различий между эпимерами в ИК-, УФ-, масс-спектрах, небольшой разницы в их температурах плавления и удельном вращении. Для определения конфигурации при С-24 применяют 'Н ЯМР-спектроскопию, используя характеристичность ХС протонов метильных групп СНз-21, СНз-26 и СНз-27 для той или иной конфигурации хирального центра С-24 [14, 18]. Различия в ХС атомов углерода боковой цепи позволяют также провести стереохимическую идентификацию таких стероидов по их спектрам 13С ЯМР [19-22]. 2.1.3. Некоторые литературные данные о губках и их стеринах Губки (тип Porifera) считаются простейшими из многоклеточных организмов. Это очень древняя группа животных, которая, по-существу, находится в эволюционном тупике [23]. Губки относятся к фильтрующим донным беспозвоночным. Все они имеют внутреннюю полость, в направлении которой через отверстия в теле перекачивается морская вода. Вместе с водой в тело попадают пищевые частицы, растворенное органическое вещество и кислород. Что касается пищевых частиц, то пищу губок составляют представители ультрапланктона (бактерии) и наннопланктона (микроводоросли, простейшие). С выходящим током воды удаляются продукты обмена. Клетки этих животных не образуют настоящих тканей (мышечных, нервных и т.д.) и обособленных органов. Имеющиеся ткани поддерживаются скелетом из твердых игл (спикул). Губки неподвижны, почти не реагируют на внешние раздражители. В клетках или межклеточном матриксе данных морских беспозвоночных поселяются различные микроорганизмы: археи, бактерии, грибы, микроводоросли и простейшие. Поэтому губки часто представляют собой симбиотические системы. Известны три класса губок: Calcispongiae или Calcarea (известковые), Hyalospongiae (стеклянные или шестилучевые) и Demospongiae (обыкновенные). О принадлежности той или иной губки к определенному классу свидетельствуют химический состав и устройство ее микроскелета [24]. Химически наиболее изучены губки самого распространенного класса Demospongiae. Изучение стероидного состава губок показало, что наиболее широко в основной массе этих животных представлены А5-стерины с обычным строением циклической системы и боковой цепи, станолы (стерины с насыщенным ядром) присутствуют в минорных количествах [25-28]. Однако немало губок продуцируют стерины, не встречающиеся в других биологических объектах. Некоторые из них были найдены в последнее время в высших растениях, но исключительно в качестве минорных компонентов стериновых фракций. Необычные стерины губок можно разделить на три группы: 1) соединения с боковой цепью, отличающейся от боковых цепей зоо- и фитостеринов наземного происхождения (необычно алкилированные, в т. ч. высокоалкилированные, циклопропан- или циклопропенсодержащие, имеющие тройную связь и другие); 2) с модифицированным тетрациклическим ядром (с редкими типами ненасыщенности — Д7, Л57, А8, т.д., А-нор-или 19-нор-стероидными ядрами); 3) с необычными чертами строения и боковой цепи, и стероидного ядра. Формулы многих необычных стеринов приведены ниже в разделе «Обсуждение ¦* результатов» при сравнительном анализе стеринов изученных нами губок. С самого начала исследователей интересовало, следует ли связывать такое разнообразие стеринов с биосинтетическими возможностями собственных организмов губок. В экспериментах с радиоактивно мечеными предшественниками было показано, что губки могут синтезировать стерины [29], получать их с пищей и модифицировать [30-35]. Нельзя также исключить возможность биосинтеза стеринов в клетках микроорганизмов-симбионтов и последующего накопления их клетками губки-хозяина. В результате опытов с несколькими разными губками было обнаружено, что их стериновый состав не просто отражает разнообразие стеринов пищевых планктонных микроорганизмов, которые неселективно фильтруются губкой, а является видо-специфичным [36]. В работах [8, 37] было показано, что стериновый состав ряда губок остается постоянным независимо от географического положения места и сезона сбора. Следовательно, он является отражением генетической конституции животного, и может быть использован в хемотаксономии как один из признаков систематического положения вида. На тему сравнительного анализа стеринов губок был опубликован ряд статей [8, 26-28, 37, 38 и другие]. Из выводов авторов этих работ следует, что использовать стерины в качестве хемотаксономических маркеров следует с осторожностью. Известно, что один и тот же признак, независимо от его природы (морфологический, биохимический и др.), позволяет характеризовать таксоны разных рангов, но ни один отдельно взятый признак не может служить показателем ранга обладающей им группы [39]. В то же время, для того, чтобы оценить истинное хемотаксономическое значение стеринов, требуются параллельные исследования генетического материала губок, их физиологии и т.д. Поэтому использовать стерины с таксономической целью нужно в совокупности с другими признаками. Основная масса видов губок принадлежит к классу Demospongiae. Это довольно разнородная группа, подразделение которой на систематические категории низшего порядка составляет значительные трудности и до настоящего времени служит предметом обсуждений. 2.2. Обсуждение результатов 2.2.1. Выделение фракций свободных стерипов губок и их разделение Стериновые фракции выделили из соответствующих этанольных экстрактов губок с помощью методов, перечисленных в таблице 3. Таблица 3. Методы выделения фракций, подфракций стеринов и индивидуальных стериновых компонентов Губки Методы выделения стеринов Xestospongia testudinaria 1 и 2, Xestospongia sp., Haliclona spp. 1-4, Callyspongia sp., Amphimedon spp. 1 и 2, неидентифицированная губка сем. Axinellidae, Oceanapia spp. 2-6, Lissodendorix behringi, Clathria major, Melophlus sarasinorum, Scalarispongia sp., Topsentia sp. 1) препаративная ТСХ на силикагеле (хлороформ:этанол, 10:0,2); 2) колоночная хроматография на силикагеле (хлороформ:этанол, 1:1); 3) аце-тилирование; 4) колоночная хроматография на силикагеле (гексан:этилацетат, 40:1) Geodinella robusta (мелководный сбор) То же (пункты 1-4) и последующие: 5) препаративная «аргентационная» ТСХ на силикагеле (бензол:гексан, 5:3); 6) колоночная хроматография на силикагеле (этилацетат) Haliclona sp. 5, Erylusformosus, неидентифицированная известковая губка 1) колоночная хроматография на силикагеле (гексан:этилацетат, 40:1-^-5:1); 2) ацетилирование; 3) колоночная хроматография на силикагеле (гексан:этил ацетат, 40:1) Didiscus aceratus То же (пункты 1-3) с последующим разделением «аргентационной» колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:бензол, 3:1-^2:1) Таблица 3 (продолжение) Губки Методы выделения стеринов Axynissa aplysinoides 1) колоночная хроматография на силикагеле (гексан:этилацетат, 40:1—>-5:1); 2) гель-фильтрация (хлороформ:этанол, 1:1); 3) повторная колоночная хроматография на силикагеле; 4) ацетилирование Phakellia elegans, Oceanapia sp. 1 1) колоночная хроматография на силикагеле (гексашэтилацетат, 40:1-+5:1); 2) ВЭЖХ на обращенной фазе (этанол); 3) ацетилирование Teichaxinella labirintica, глубоководная Geodinella robusta, Agelas mauritiana, Darwinella australiensis 1) колоночная хроматография на силикагеле (гексашэтилацетат, 40:1—>5:1); 2) ВЭЖХ на прямой фазе (гексашэтилацетат, 5:1); 3) ацетилирование Monanchora clathrata 1) колоночная хроматография на силикагеле (гексашэтилацетат, 40:1—»5:1), фракцию 4а-метил-стеринов разделили методом ВЭЖХ на обращенной фазе (80% этанол); 2) ацетилирование Выделенные фракции, подфракции и индивидуальные стерины анализировали в виде ацетатов методами капиллярной ГЖХ, ГЖХ-МС и !Н ЯМР-спектроскопии. ОВУ, данные масс-спектров и'Н ЯМР-спектров ацетатов обнаруженных стеринов приведены в таблице 43 («Экспериментальная часть»). 2.2.2. Стерины трех губок рода Xestospongia (отряд Haplosclerida, семейство Petrosiidae) В стериновых фракциях тропических губок Xestospongia testudinaria I, Xestospongia testudinaria 2 (собраны в разных местах, имеют разные стериновые составы) и Xestospongia sp. обнаружено 24 стерина, из них идентифицировано 22 известных стероидных спирта (таблица 4). Таблица 4. Стерины трех исследованных губок рода Xestospongia № Название Краткое обозначение ОВУ X. test. 1 (03-81) X.sp. (04-492) X. test. 2* (03-236) СВР 5 НР-5MS 1 27-Нор-24?-метилхолеста-5,22Е-диен-Зр-ол (А2) С27А5'22 0,895 0,93 следы 0,50 2 Холеста-5,22Е-диен -Зр-ол (A3) СгуА5-22 0,925 0,95 2,40 3,02 1,47 3 5а-Холест-22Е-ен-Зр-ол (ВЗ) С27Л22 0,95 0,96 2,58 0,99 1,54 4 Холест-5-ен-Зр-ол (холестерин, А4) С27А5 1,00 1,00 9,75 4,86 12,21 5 5а-Холестан-ЗР-ол (В4) С27А° 1,02 1,02 12,37 5,86 5,67 6 24?,-Метилхолеста-5,22Е-диен-Зр-ол(А8) С28А5'2 1,10 1,07 13,69 6,79 5,53 7 24%-Метил-5 а-хо лест-22Е-ен-ЗР-ол (В8) С28А22 1,13 1,09 2,74 0,75 1,65 8 24-Метилхолеста-5,24(28)-диен-Зр-ол (А10) С28д^Р8)' 1,23 1,17 14,22 12,69 9 24^-Метилхолест-5-ен-Зр-ол (А13) С28А5 1,24 2,00 2,44 10 24Е,-Метил-5а-холест-24(28)-ен-Зр-ол (В10) C2SA24^ 1,28 1,19 1,40 27,29 11 24%-Этилхолеста-5,22Е-диен-Зр-ол(А15) с^д5-22 1,33 1,24 5,04 3,09 2,42 12 24-Метил-5а-холеста-7,24(28)-диен-33-ол (СЮ) С28Д^(28) 1,39 1,27 1,84 1,82 13 24Е,-Этилхолеста-5,25-диен-Зр-ол(А18) С^А5"25 1,46 1,32 1,39 0,80 3,89 14 24Е,-Этилхолест-5-ен-Зр-ол (А20) С29А5 1,52 12,19 8,28 15 24-Этилхолеста-5,24(28)Е-диен-Зр-ол (фукостерин, А23) С29Д5,24(28)Е 1,36 22,07 16 24-Этил-5а-холест-24(28)Е-ен-ЗР-ол (В23) С29Д24(28)Е 1,39 3,64 17 24,26-Диметилхолеста-5,24(28)-диен-Зр-ол (А25) С29А5'24(28) 1,55 3,19 18 24-Этилхолеста-5,24(28)г-диен-Зр-ол (изофукостерин, А26) С29д5)24(28)2 1,57 1,39 16,81 1,20 19 Неидентифицированный стерин С30А5'х 1,71 2,48 20 24-Этил-5сс-холест-24(28)г-ен-ЗР-ол (В26) C29A24(28)Z 1,62 1,34 17 Таблица 4 (продолжение) Название Краткое обозначение ОВУ X. test. 1* (03-81) X.sp. (04-492) X. test. 2* (03-236) СВР 5 НР-5MS 21 24-Этил-5 сс-хо леста-7,24(28)Е-диен-3(3-ол (С23) С29д7,24(28)Е 1,49 3,33 22 24-Пропилхолеста-5,24(28)г-диен-Зр-ол(А28) СзоД5,24(28)2 1,79 1,55 0,69 23 24,26^,27^-Триметилхолеста-5,24(28)-диен-Зр-ол (ксестостерин, А29) СзоА5Д4(28) 1,88 44,4 24 Неидентифицированный стерин С30Ах 1,93 4,45 X. test. 1 — X. testudinaria 1 Под названием губки указан ее шифр. X. test. 2-Х. testudinaria2 Стерины X. testudinaria 1. Идентифицировано 16 Сг7-С29-стеринов. Основными компонентами фракции свободных стеринов являются А5-стероидные спирты (77,5%). Станолов найдено 20,4%, Д7-стеринов — 1,8%. В качестве доминирующих стеринов в данной фракции идентифицированы изофукостерин (А26), 24-метиленхолестерин (А10), 24?-метилхолеста-5,22Е-диен-Зр-ол (А8), холестанол (В4) и 24?-этилхолест-5-ен-Зр-ол (А20), которые присутствуют в ней в близких количествах. Стерины X. testudinaria 2. Идентифицировано 12 Сг7-Сзо-стеринов, в том числе Д5-соединений — 86,3%, станолов - 13,3%. Основной стерин - ксестостерин (А29, 44,4%). Это редкое соединение впервые было выделено из родственной губки Xestospongia muta Джерасси с сотрудниками [40]. В отличие от обычных стеринов оно имеет метальные В масс-спектре ацетата соединения А29, кроме прочих пиков, характерных для ацетатов СзоД -стеринов с дополнительной двойной связью, наблюдали интенсивный пик при m/z 296, указывающий на 24(28)-положение второй двойной связи стерина в боковой цепи. Пик иона К^-АсОН ч составлял 100% (как в масс-спектре ацетата 24-метиленхолестерина), тогда как в масс-спектрах более распространенных пропилидензамещенных стеринов он имеет интенсивность около 10%. В !Н ЯМР-спектре стерина А29 присутствовали сигналы протонов экзо-метиленовой группы при 4,80 и 4,68

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	23317.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

03.11.24 Лексикографический анализ единиц поля

03.11.24 Из истории слова гость и его производных

03.11.24 Семантическое поле гость в русском языке

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2024. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.