Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе

У нас уже 21989 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе

Количество страниц	116

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	23020.doc

Содержание	Содержание 2 СОДЕРЖАНИЕ Список сокращений...4 Введение...5 Глава 1. Обзор литературы...14 1.1. Краткие сведения о возбудителе кишечного иерсиниоза...14 1.2. Культурально-морфологические свойства Y. enterocolitica...17 1.3. Биохимические свойства иерсиний...19 1.4. Антигенное строение и серологические свойства иерсиний...21 1.5. Патогенность Y. enterocolitica...23 1.6. Психрофильные свойства иерсиний...25 1.7. Устойчивость во внешней среде и влияние на Y. enterocolitica различных факторов...28 1.8. Роль сельскохозяйственных животных в эпидемиологии и эпизоотологии иерсиниоза...31 1.9. Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах...35 1.10. Лабораторная диагностика иерсиниоза...38 Глава 2. Экспериментальная часть...43 2.1. Материалы и методы...43 2.1.1. Штаммы и биопрепараты...43 2.1.2. Питательные среды...43 2.1.3. Тест-системы для изучения биохимических свойств...45 2.1.4. Методика выделения Y. enterocolitica из мяса и мясопродуктов, изучение и идентификация выделенных штаммов...46 2.1.5. Изучение влияния параметров холодильной обработки и режимов хранения мяса на выживаемость Y.enterocolitica...52 2.1.6. Исследование выживаемости Y.enterocolitica при температурах +2...+4 °С в мясном фарше в зависимости от различных концентраций NaCl...53 3 2.1.7. Методика определения влияния нитрита натрия, фосфатов и лактата на жизнеспособность Y.enterocolitica в мясном фарше...54 2.1.8. Исследование антагонистического действия стартовых культур и сушки на выживаемость Y.enterocolitica в традиционных сыровяленых колбасах...55 2.1.9. Непрямой метод флуоресцирующих антител для быстрого обнаружения Y.enterocolitica в мясе...57 2.2. Результаты исследования и их обсуждение...58 2.2.1. Исследование мяса и мясопродуктов на наличие иерсиний...58 2.2.2. Изучение влияния низких температур на динамику размножения Y. enterocolitica в мясном фарше...65 2.2.3. Определение эффективности пищевых добавок (соли, нитрита натрия, фосфатов, лактата) и стартовых культур для подавления роста Y. enterocolitica в мясопродуктах при созревании фарша...70 2.2.4. Влияние стартовых культур и сушки на жизнеспособность Y.enterocolitica в традиционных сыровяленых колбасах...81 2.2.5. Индикация Y.enterocolitica в мясе непрямым методом флуоресцирующих антител...84 Заключение...88 Выводы...97 Список использованных литературных источников...98 Приложение 1...116 Введение 4 Список сокращений АГВ — среда для определения антибиотикочувствительности микроорганизмов БКД - буферно-казеиново-дрожжевая среда ИПС — иерсиниозно-псевдотуберкулезная среда ИФА — иммуноферментный анализ КРС - крупный рогатый скот ЛПС — липополисахарид МПА — мясопептонный агар МПБ - мясопептонный бульон МФА — метод флуоресцирующих антител НМФА — непрямой метод флуоресцирующих антител ОКИ — острые кишечные инфекции ПЖА — полужидкий агар ПЦР — полимеразная цепная реакция pYV — плазмида вирулентности иерсиний РА — реакция агглютинации РКОА — реакция коагглютинации РЛА - реакция латексной агглютинации СБТС — дифференциально-диагностическая среда с бромтимоловым синим СВИ — сыворотка к вирулентным иерсиниям ФБР — фосфатно-буферный раствор CIN-arap (cefsulodin-irgasan-novobiocin) — цефсулодин-иргазан- новобиоциновая среда 5 Введение Актуальность темы Интерес к проблеме кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза возрастает с каждым годом, что обусловлено не только широким распространением этих заболеваний, но и большим экологическим значением их возбудителей. До недавнего времени они считались достаточно редкими и не привлекали к себе особого внимания специалистов. Но с 60-70 гг. ситуация изменилась, когда была доказана их повсеместная распространенность. Для специалистов мясной промышленности важно то, что мясо и мясопродукты являются частыми факторами передачи при иерсиниозе. По современным представлениям, кишечный иерсиниоз относится к пищевым зооно-зам, то есть к болезням, источником инфекции при которых являются больные сельскохозяйственные, домашние и дикие животные, а факторами передачи - пищевые продукты. Установлено, что при кишечном иерсиниозе потенциальными факторами передачи бактерий являются пищевые продукты животного происхождения (мясо, молоко), а также корма, овощи, фрукты, которые могут быть контаминированы на всех этапах их получения, хранения и реализации (Покровский, 1993; Ющенко, 1997; Ленченко, 2002). По данным ВОЗ (1977) распространенность иерсиниоза носит глобальный характер, и эта болезнь регистрируется более чем в 30 странах мира, но чаще в странах с более прохладным климатом. В частности, в Финляндии абсолютное число заболевших в 1999 г. составило 634 человека, в 2001г.- 720 человек; в Швеции в 1999 Г.-549 человек, в 2001 Г.-579 человек; в Дании соответственно 337 и 285 человек. В Латвии, Литве, Эстонии и Архангельской области уровень заболеваемости характеризуется средними показателями, но имеет тенденцию к повышению. Например, в Латвии в 1999 г. абсолютное число заболевших составило 181 человек, а 2001 г. - 204 человека, в Архангельской области 100 и 220 человек. Число заболевших иерсиниозом в Санкт-Петербурге в 1999 г. — 478 человек, в 2001 - 321 человек. 6 Заболеваемость иерсиниозом в РФ на протяжении многих лет остается на достаточно высоком уровне. По данным Центрального НИИ Эпидемиологии Минздрава России этот показатель варьирует по отдельным регионам страны и на некоторых территориях сохраняется достаточно высоким — до 40-50 и даже 138 на 100 тыс. населения. В странах северного полушария - Нидерландах, Бельгии, Дании, Норвегии, Финляндии, а также в Германии, Канаде, Австралии кишечный иерси-ниоз по уровню заболеваемости занимает третье место среди ОКИ после сальмонеллеза и кампилобактериоза (Garrigue, Poveda, Carniel, 1993; Logue et al., 1996; Померанцев, Васильев, 1998; Ленченко, 2000). В России иерсинио-зы занимают второе место после сальмонеллезов, а в некоторых странах превосходят по распространенности сальмонеллез, колибактериоз и шигеллез (Куликовский, Джентемирова, 1993; Куликовский, Соснина, 1995; Черкасский, 1995; Померанцев, Васильев, 1998; Шумилов, Мельниченко, 1998). По данным Саратовского областного центра санэпиднадзора за период с 1997 по 2002 гг. в области систематически регистрируется иерсиниоз среди людей, причем доля детей среди заболевших составляет 60 %. Наблюдается рост заболеваемости: 1999 г. — 10 случаев, 2000 г. — 26, 2001 г. — 18. В 2001 г. с целью изучения иммунной прослойки среди населения по иерси-ниозам в 17 районах Саратовской области сотрудниками областного центра санэпиднадзора г. Саратова были обследованы 534 человека. Из них у 13 человек (2,4 %) обнаружены антитела к Y. enterocolitica 03 серовара в диагностических титрах, в том числе у 10 человек - 1:200: у 2 - 1:400, у 1 - 1:800. Лица с диагностическими титрами были выявлены в Аркадакском районе — 3, в Хвалынском - 4, в Петровском - 6. Причем, отмечается профессиональная принадлежность серопозитивных лиц в Петровском районе - доярки, свинарки, конюхи, что хорошо согласуется с данными Е.С. Осипчук (2003) о широком распространении кишечного иерсиниоза среди сельскохозяйственных животных в этом районе и подтверждает мнение некоторых авторов об иер-синиозе как о профессиональном заболевании (Колос, 1989). 7 Проблема иерсиниозов является актуальной как для здравоохранения, так и для предприятий пищевой промышленности. Центр Госсанэпиднадзора г. Москвы сообщает, что экономический ущерб, нанесенный иерсиниозами в 1997 г., составил 1 млрд. 208 млн. рублей (Зайцев и соавт., 1999; Шаханина, Осипова, Радуто, 2001). Н.М. Хакимов (1999) указывает, что 3-15 % всех ОКИ приходится на долю иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Однако следует отметить, что по количеству выявленных случаев нельзя судить об истинном распространении заболеваний, так как в связи с клиническим полиморфизмом они нередко проходят под другими диагнозами: дизентерия, сальмонел-лез, вирусный гепатит А, аппендицит и др. (Догель, Карплюк, 1984; Ценева, 1997; Зайцев и соавт., 1999; Ленченко, 2002). В.И. Покровский (1999) отмечает, что, несмотря на выраженную тенденцию к увеличению числа заболеваний иерсиниозами, данные часто являются заниженными из-за недостаточно полной их регистрации. Официальная регистрация иерсиниоза животных в РФ стала проводиться лишь с 1996 г. (Санитарные правила СП 3.1. 094 — 96; Ветеринарные правила ВП 13.3.1318 - 96). До этого появлялись только единичные публикации об изоляции Г. enterocolitica от сельскохозяйственных животных (Васильев, 1986; Кирьянов, Савчук, 1989; Стефанов, 1989; Писаренко, Куцева-лов, Проценко, 1990; Каландадзе, 1991). Иерсиниоз сельскохозяйственных животных впервые был обнаружен в Саратовской области Л.Ф. Зыкиным и соавт. в 1997 году. В течение последних семи лет на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы Саратовского государственного аграрного университета проводятся исследования по иереи ниозу сельскохозяйственных животных. Их результаты обобщены в диссертациях З.Ю. Хапцева, СВ. Иващенко, Е.С. Гвинджилия, многочисленных отчетах, докладах и публикациях. За последние десятилетия отечественными и зарубежными исследователями получены новые результаты, позволяющие иначе рассматривать некоторые вопросы этиологии, патогенеза и эпидемиологии иерсиниоза. 8 Но, несмотря на определенные успехи в проблеме изучения кишечного иерсиниоза, особенно в медицинском аспекте, остается много неизученных вопросов, например, касающихся роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи при этой инфекции. Анализируя современную литературу, можно сделать выводы, что исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах проводятся постоянно. Также опубликованы данные по влиянию различных факторов: рН, упаковки, молочно-кислых бактерий, СВЧ-энергии на выживаемость иерсиний в мясе и мясопродуктах. Но эти сведения носят несистематизированный, разрозненный характер и не создают цельного представления обо всех аспектах проблемы. В связи со свойством психрофильности, стандартные условия хранения мясопродуктов при низких положительных температурах способствуют размножению и накоплению Y. enterocolitica. Поэтому актуальна выработка условий хранения мясопродуктов, препятствующих накоплению в них возбудителя. Как было сказано выше, иерсиниоз был включен в перечень официально регистрируемых лишь в 1996 году (СП 3.1.094-96, ВП 13.3.1318-96). В связи с этим работники животноводческих хозяйств и мясоперерабатывающих предприятий мало информированы о кишечном иерсиниозе и путях его распространения. В основную группу риска попадают ветеринарные работники (работники хозяйств по уходу и обслуживанию скота, животноводы, зоотехники) и работники мясокомбинатов, птицеферм, птицефабрик, мясоперерабатывающих предприятий. В Саратовской области исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах не проводились. Кроме того, не изучен вопрос о механизмах контаминации иерсиниями мясопродуктов и разработке методов, препятствующих этому процессу. Выяснение всех этих вопросов представляет научный и практический интерес. 9 Целью диссертационной работы явилось выяснение роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи возбудителя при иерсиниозной инфекции, а также установление влияния различных технологических факторов и пищевых добавок на выживаемость Y. enterocolitica в процессе производства колбасных изделий. Задачи исследования: 1. Исследовать мясо и мясопродукты, отобранные из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова, на наличие Y. enterocolitica. 2. Изучить динамику размножения кишечных иерсиний в мясном фарше при различных режимах охлаждения и хранения мяса и мясопродуктов. 3. Определить эффективность применения ряда добавок, используемых в мясоперерабатывающей промышленности, для подавления размножения Y. enterocolitica в мясопродуктах. 4. Провести исследование антагонистического действия молочнокислых микроорганизмов на выживаемость Y. enterocolitica в условиях производства сыровяленых колбас. 5. Апробировать непрямой метод флуоресцирующих антител для экспресс-индикации Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах. Научная новизна 1. Впервые в Саратовской области из мяса и мясопродуктов изолированы культуры Y. enterocolitica: 10 штаммов обладали признаками вирулентных иерсиний, у остальных четырех маркеры вирулентности носили вариабельный характер. 2. Доказано, что сыровяленые и сырокопченые колбасы являются благоприятными объектами для размножения в них кишечных иерсиний. 3. Показано, что использование некоторых штаммов молочно-кислых бактерий оказывает задерживающее действие на рост К enterocolitica в сыро-вяленых колбасах. 10 4. Установлено, что при стандартных режимах охлаждения и хранения происходит значительное накопление возбудителя иерсиниоза в мясе, что может способствовать передаче иерсиниозной инфекции. 5. Пищевые добавки, используемые в технологии изготовления мясопродуктов, в определенных концентрациях оказывают ингибирующее действие на размножение Y. enterocolitica. 6. Показано преимущество непрямого метода флуоресцирующих антител для индикации Y. enterocolitica в мясе по сравнению с бактериологическим методом по чувствительности и скорости проведения анализа. Практическая значимость Впервые показано, что мясо из 10 различных районов Саратовской области, а также мясной фарш из сети магазинов розничной торговли г. Саратова контаминированы иерсиниями, то есть могут являться вероятными причинами инфекции. Обращают внимание случаи изоляции иерсиний из мяса, полученного из животноводческих объектов Петровского района, неблагополучного по иерсиниозу. Установлено, что быстрое охлаждение мяса при —3...—5 °С и последующее его хранение при —1...-2 °С оказывают задерживающее действие на размножение Y. enterocolitica и могут быть рекомендованы технологам мясоперерабатывающих производств как наиболее эффективные для подавления размножения этих бактерий в мясе. В результате проведенных исследований определены концентрации пищевых добавок, препятствующие накоплению в мясопродуктах возбудителя иерсиниоза: хлорид натрия в концентрации 4,5 %, нитрит натрия — 0,01 %, фосфаты - 0,5 %, лактат натрия — 0,3 %. Непрямой метод флуоресцирующих антител является более информативным и эффективным методом обнаружения Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах по сравнению с культуральным методом, позволяет существен- 11 но сократить время проведения анализа и рекомендуется как экспресс-метод при выявлении иерсиний в мясе. Апробированные схемы выявления возбудителя иерсиниоза в мясе и мясопродуктах: экспресс-индикация и бактериологическое исследование рекомендуются к использованию практическим лабораториям при контроле мяса и мясопродуктов. По результатам исследования подготовлены «Методические рекомендации по обнаружению Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах», утвержденные УМК Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» им. Н.И. Вавилова (протокол № 34 от 17 декабря 2004 г.). Разработанные методические рекомендации позволяют получить полное представление о проведении исследования мяса на наличие Y. enterocolitica и могут быть использованы специалистами всех уровней, связанными с проведением экспертизы мяса и мясопродуктов, а также при обучении студентов специальностей «Технология мяса и мясопродуктов», «Ветеринария» и «Биотехнология». На защиту выносятся следующие положения: 1. Инфицированность мяса и мясопродуктов Y. enterocolitica на территории Саратовской области составляет 9, 92 %. 2. Наиболее эффективным режимом холодильной обработки для подавления жизнеспособности иерсиний в мясе и мясопродуктах является охлаждение при —3...-5 °С с дальнейшим подмораживанием. 3. Хлорид натрия, нитрит натрия, фосфаты и лактат в определенных концентрациях (4,5 %, 0,01 %, 0,5 %, 0,3 % соответственно) значительно уменьшают количество кишечных иерсиний в мясном фарше. 4. Препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы L.plantarium, оказывает сильное ингибирующее действие на размножение Y. enterocolitica. 12 5. Непрямой метод флуоресцирующих антител обладает высокой чувствительностью (1x104 КОЕ/мл) и является в два раза более информативным, чем бактериологический метод. Апробация работы Материалы диссертации доложены на Межрегиональных научных конференциях молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа «Вавиловские чтения» (Саратов, 2003; 2004), на Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки — к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (Тверь, 2003), а также на 2-ой региональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2004). Материалы диссертации представлены в отчетах НИР Института ветеринарной медицины и биотехнологии в рамках ассоциации аграрного образования и науки за 2003 - 2004 гг. Публикации По материалам диссертации опубликовано 7 работ. Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводов и списка использованных литературных источников. Обзор литературы включает 10 разделов, посвященных проблеме иерсиниоза как инфекции, факторами передачи при которой, в частности, являются мясо и мясопродукты. Материалы диссертации изложены на 116 страницах машинописного текста, включают 7 рисунков, 12 таблиц. Список использованных литературных источников включает 182 наименования, в том числе 65 иностранных. 13 Работа выполнена на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы , Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» в рамках основных тем направления работы кафедры: 1. НИР № 21/02 «Роль сельскохозяйственных животных в распространении некоторых бактериальных и вирусных инфекций в Саратовской области» (2001 - 2002 гг.). 2. НИР № 21/ОЗВ «Разработка и внедрение эффективных методов дифференциальной диагностики туберкулеза, кишечного иерсиниоза, псевдотуберкулеза, листериоза и лейкоза сельскохозяйственных животных в Саратовской области» (2002 - 2003 гг.).

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	23020.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

03.11.24 Лексикографический анализ единиц поля

03.11.24 Из истории слова гость и его производных

03.11.24 Семантическое поле гость в русском языке

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2024. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.