У нас уже 21989 рефератов, курсовых и дипломных работ
Заказать диплом, курсовую, диссертацию


Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Понравилось
Не понравилось





Книга жалоб
и предложений

 





Название Исследование зараженности членистоногий переносчиков дельты Волги и Волго-Лкту5инской поймы вирусом Западного Нила и молекулярно-генетическая характеристика штаммов LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human B3H
Количество страниц 100
ВУЗ МГИУ
Год сдачи 2010
Бесплатно Скачать 22981.doc 
Содержание Содержание
ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ...5

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...10

1.1 Общая характеристика флавивирусов...10

1.1.1 Общий план строения и трансляции генома

флавивирусов...13

1.1.1.2 Структура генома...13

1.1.1.3 Репликация РНК...15

1.1.1.4 Трансляция и процессинг...16

1.1.1.5 Стратегия вирусного генома...19

1.1.2 Белки флавивирусов и их функции...20

1.1.2.1 Структурные белки флавивирусов...20

1.1.2.2 Неструктурные белки флавивирусов...25

1.2 Филогения различных изолятов вируса

Западного Нила...34

1.3 Исследования ВЗН, проведенные в лаборатории Молекулярной генетики института Вирусологии РАМН...36

1.4 Этиология и эпидемиология...44

1.5 Клиника заболевания...52

1.6 Резервуар вируса среди позвоночных...53

1.7 Переносчики вирусной инфекции...54

1.8 Сохранение вирусной популяции в межэпизоотический период...58

1.9 Ареал распространения заболевания за рубежом...59

1.10 Ареал распространения заболевания в России и странах СНГ...61

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ...64

2.1 Место сбора и объем полевого материала...64

2.2 Методы сбора, транспортировки, хранения и подготовки

полевых материалов...67

2.3 Методы молекулярно-биологических исследований...67

2.3.1. Выделение тотальной РНК из осветленной клеточной

или тканевой суспензии...67

2.3.2 Реакция обратной транскрипции...67

2.3.3 Проведение полимеразной цепной реакции...68

2.3.4. Электрофорез ДНК...70

2.3.5. Секвенирование ДНК...71

2.4 Компьютерная обработка данных...71

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...71

3.1.Определение полноразмерных нуклеотидных последовательностей геномов штаммов вируса ЗН LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human...71

3.2. Создание ОТ-ПЦР тест системы для обнаружения РНК вируса ЛЗН в клинических образцах и пробах полевого материала ...77

3.3 Определение специфичности и чувствительности ОТ-ПЦР тест - системы, лабораторная модификация системы...78

3.4 Исследование комаров и клещей Астраханской области на наличие вируса ЗН при помощи ОТ-ПЦР системы...88

3.4.1. Анализ зараженности видового состава комаров...89

3.5. Нуклеотидный и филогенетический анализ 5'-концевой области генома вируса ЗН из полевых изолятов...93

3.6. Обсуждение...96

ВЫВОДЫ...98

Благодарности...99

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ...100

ВВЕДЕНИЕ.

Вирус ЗН принадлежит к семейству флавивирусов (Flaviviridae ) p. Flavivirus. Семейство флавивирусов ( Flaviviridae ) включает в себя ряд инфекционных вирусов, вызывающих опасные заболевания у человека и животных.

Актуальность проблемы.

Эпидемические вспышки лихорадки Западного Нила (ЛЗН) различного масштаба и интенсивности регистрируются практически каждый год в странах Африки и Ближнего Востока, реже в Европе и Индии, иногда в Средней Азии (Львов, 2000; Murgue et al., 2002).

Обширная эпидемическая вспышка ЛЗН возникла в июле-октябре 1996 г. в Юго-Восточной Румынии в южном течении Дуная. Заболеваемость достигла 12,4 на 100 тыс. и охватила 7 областей, включая Бухарест.

Вспышки лихорадки Западного Нила описывались в Израиле в период с 1950 по 1970 гг., однако продолжающиеся по сей день серологические и эпидемиологические исследования показывают, что циркуляция вируса в этом регионе продолжается. (Hindiyeh, 2001)

Эпидемическая вспышка ЛЗН совершенно неожиданно возникла в конце июля-сентября 1999г. с пиком во второй половине августа в Нью-Йорке и его окрестностях. (Lancotti et al., 1999). В общей сложности выявлено 56 случаев (31 подтвержден лабораторно), из которых 7 с летальным исходом (12,5%). Вирус ЗН обнаружен в комарах Culex pipiens, отловленных в сентябре-октябре в Нью-Йорке, и округах Нассау и Суффолк, а с помощью ПЦР положительный результат получен с комарами Culex spp. и Aedes vexans, собранных в середине сентября в округе Хадсон, Нью-

Джерси. С помощью ПЦР положительные результаты получены при обследовании мозга погибших птиц из Нью-Йорка (Бронис, Бруклин, Манхэттен, Квинс, о.Статен, а также из округов Нассау,Оранж,Рокленд,Саратога,Суффолк и Вестчестер), в штате Нью-Джерси (12 округов), в штате Коннектикут (три округа). (Ebel, 2001) (Lanciotti, 2002)

Начиная с 1999 г. существенно обострилась эпидемическая ситуация по лихорадке Западного Нила на юге России (Lvov, 2004). Возникшие в последние 4 года на юге России вспышки лихорадки Западного Нила (ЛЗН), свидетельствуют о приоритетной значимости проблемы новых и возвращающихся инфекций в системе биобезопасности. (Львов, 2000).

В связи с широким распространением заболевания возникает необходимость исследования причин. Все это обусловило необходимость разработки программы комплексного изучения природных и синантропных очагов инфекции.

Инфекция ЛЗН относится к природно-очаговым зоонозам поскольку имеет выраженный очаговый характер (Львов и др., 1989). Природная циркуляция вируса ЗН в очаге происходит в системе «птицы - комары - птицы», при этом комары также эффективно заражают и других теплокровных, в том числе человека. Зараженность вирусом ЗН комаров является важным показателем активности природного очага и позволяет прогнозировать развитие эпидемической ситуации.

В связи с широким распространением заболевания возникает необходимость исследования причин. Все это обусловило необходимость разработки программы комплексного изучения природных и синантропных очагов инфекции.

Цель и задачи работы.

Целью данной работы явилась разработка молекулярно-биологических подходов к обследованию полевых материалов и оценка эпидемической ситуации распространенности вируса ЗН в дельте Волги и Волго-Ахтубинской пойме

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: Задачи:

- Определение полноразмерной нуклеотидной последовательности штаммов LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human вируса ЗН, выделенных во время эпидемических вспышек 1999г. и 2000г., с целью использования этих данных при дизайне праймеров для ОТ-ПЦР диагностической тест-системы.

Разработка ОТ-ПЦР системы для чувствительной и специфичной детекции РНК вируса ЗН в биологических образцах.

- С использованием разработанной ОТ-ПЦР системы исследовать пробы полевого материала (комары и клещи), собранные в местах вспышки ЛЗН (дельта Волги и Волго-Ахтубинская пойма в 2001-2004гг.), на наличие в них РНК вируса Западного Нила, определение процента зараженности переносчиков.

- Нуклеотидный анализ фрагментов геномов вируса ЗН из проб полевого материала. На основании полученных нуклеотидных последовательностей с целью проведения филогенетического

анализа и определения генетических характеристик выделенных штаммов вируса ЗН, циркулирующих в популяциях переносчиков в период вспышек 2001-2004гг.

Положения, выносимые на защиту

- Полные нуклеотидные последовательности геномов штаммов вируса ЗН, полученных от человека LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human.

- Разработка и оптимизация ОТ-ПЦР тест-системы для обнаружения РНК вируса ЗН в полевых образцах.

- Определение общего и видового процента зараженности вирусом ЗН комаров и клещей, обитающих в дельте Волги

- Типирование штаммов ЗН, циркулировавших среди переносчиков в период вспышек 2001-2004г. с помощью филогенетического анализа фрагментов РНК.

Практическое значение.

В результате проведенной работы были определены полные нуклеотидные последовательности геномов двух штаммов вируса, выделенных на территории Астраханской и Волгоградской областей, предоставленных институтом вирусологии им. Д. И. Ивановского.

Созданная в процессе работы ОТ-ПЦР тест-система является высокочувствительной и достаточно проста в применении, что позволит использовать эту систему непосредственно в местах сбора полевого материала. Разработанная тест-система способна детектировать РНК вируса ЗН, относящиеся ко всем четырем филогенетическим группам. Таким образом это обеспечило максимально возможную, на данный момент, универсальность тест -системы. Разработанная тест - система «Способ обнаружения вируса лихорадки Западного Нила» защищена патентом РФ №2199589 от

27.02.2003. (авторы изобретения: Воронина А.Г., Прилипов А.Г., Львов Д.К., Самохвалов Е.И., Садыкова Г.К., Альховский СВ.,)

Впервые в России проведено масштабное исследование зараженности вирусом ЗН членистоногих переносчиков в природных очагах дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы с использованием ПЦР. Всего обследовано 284308 комаров и 7303 клещей, собранных как в диких, так и в антропогенных биоценозах за 2001-2004гг. Согласно полученным результатам, средний уровень зараженности вирусом ЗН за 2001-2004гг. среди комаров -0,028%, среди клещей - 0,74%. Также, в результате филогенетического анализа положительных ПЦР-фрагментов, были сделаны выводы относительно групповой принадлежности обнаруженных штаммов вируса ЗН. Нами было определено, что на обследуемой территории циркулировали 79 штаммов (91,86%) относящихся к 1-му генотипу, 4 штамма (4,65%) - ко II генотипу, ни одного к III, и 3 штамма (3,49%) относятся к IV генотипу.
Список литературы
Цена, в рублях:

(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)		 1425
Скачать бесплатно 22981.doc 





Найти готовую работу


ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:


Связаться

Доставка любой диссертации из России и Украины

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ


Ссылки:

Выполнение и продажа диссертаций, бесплатный каталог статей и авторефератов

Счетчики:

Besucherzahler
счетчик посещений

© 2006-2024. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.