У нас уже
176407
рефератов, курсовых и дипломных работ
Сделать закладку на сайт
Главная
Сделать заказ
Готовые работы
Почему именно мы?
Ценовая политика
Как оплатить?
Подбор персонала
О нас
Творчество авторов
Быстрый переход к готовым работам
Контрольные
Рефераты
Отчеты
Курсовые
Дипломы
Диссертации
Мнение посетителей:
Понравилось
Не понравилось
Книга жалоб
и предложений
Название
Влияние перфторана на токсико— и фармакокинетику физиологически активный веществ
Количество страниц
109
ВУЗ
МГИУ
Год сдачи
2010
Бесплатно Скачать
23381.doc
Содержание
Содержание
Перечень сокращений и условных обозначений — 4
Введение — 6
Глава 1. Биологическая активность перфторуглеродных соединений и их способность влиять на хемобиокинетику ксенобиотиков (обзор литературы) — 11
1.1. Свойства перфторуглеродных соединений и их кинетика в организме млекопитающих — 11
1.2. Биологическая активность ПФОС — 18
1.3. Некоторые аспекты фармакокинетического взаимодействия физиологически активных веществ — 23
1.4. Способность ПФОС и их эмульсий влиять на хемобиокинетику ксенобиотиков
1.5. Заключение — 37 Глава 2. Материалы и методы исследования — 40
2.1. Материалы исследования — 40
2.2. Количественные методы определения содержания препаратов
в крови — 46
2.2.1. Метод определения метилового и этилового спиртов — 47
2.2.2. Метод определения ампициллина — 47
2.2.3. Метод определения амитриптилина — 48
2.2.4. Метод определения сибазона — 49
2.2.5. Метод определения перфтордекалина — 50
2.3. Расчет фармакокинетических констант и параметров — 50
2.4. Статистическая обработка результатов — 55 Глава 3. Результаты исследования
3.1. Влияние перфторана на токсикокинетику метанола и этанола — 57
3.2. Влияние перфторана на фармакокинетику ампициллина — 66
3.3. Влияние перфторана на фармакокинетику амитриптилина — 70
3.4. Влияние перфторана на фармакокинетику сибазона — 75
3.5. Фармакокинетика перфторана на фоне действия сибазона — 84
3.6. Заключение — 90 Глава 4. Обсуждение полученных результатов — 93 Выводы — 106 Практические рекомендации — 108 Список использованной.литературы — 109
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Отечественный плазмозаменитель с газотранспортной функцией перфторан представляет собой 10 об.% субмикронную эмульсию перфторорганических соединений (ПФОС) - перфтор-декалина (ПФД) и перфторметилциклогексилпиперидина (ПФМЦП) в соотношении 2:1. Функцию эмульгатора в рецептуре выполняет проксанол (Ива-ницкий Г.Р., Воробьев СИ., 1997). Перфторан находит все более широкое применение в различных областях клинической медицины, но, прежде всего, при лечении неотложных состояний и, в частности, массивной кровопотери (Софронов Г.А. и соавт., 2002, 2004). Показано, что инфузия перфторана в условиях кровопотери способствует обеспечению тканей кислородом, оказывает положительный эффект на центральную и периферическую гемодинамику, микроциркуляцию, кислотно-основное состояние, иммунную систему, обеспечивает детоксикационное, противовоспалительное, а также мембрано-стабилизирующее действие (Мороз В.В., Крылов Н.Л., 1999). Внедрение перфторана в повседневную лечебную практику одновременно породило новую проблему, имеющую исключительное научно-практическое значение -взаимодействие с другими лекарственными средствами, применяемыми в терапии неотложных состояний совместно либо последовательно с перфтора-ном.
В общем виде взаимодействие любых лекарственных средств может проявляться на трех уровнях: фармакокинетическом, фармакодинамическом и фармакогенетическом (Гуськова Т.А., 2003). Результатом взаимодействия может стать усиление или ослабление специфической активности лекарственного средства, а также появление побочных и даже токсических эффектов.
Имеются серьезные научные предпосылки и отдельные экспериментальные и клинические наблюдения, свидетельствующие о реальности изме-
нения физиологической активности химических веществ, будь то лекарственные препараты или некоторые яды на фоне предварительного введения в организм перфторана. В частности, известно, что ПФОС оказывают существенное влияние на систему естественной детоксикации химических веществ в организме животных (Образцов В.В. и соавт., 1985; Михайлов Г.М. и со-авт., 1990; Плужников Н.Н., 1995; Шилов В.В., 1999).
Имеются единичные наблюдения изменения фармакокинетики лекарственных средств и токсикокинетики ядов на фоне эмульсий ПФОС. Так, в условиях частичного замещения крови эмульсией Флуозол-ДА (20% смесь ПФД и перфтортрипропиламина в соотношении 7:3, стабилизированная 2,7% плюроником F-86 и 0,4% фосфолипидом) изменялась фармакокинетика сульфаметазина (Kemner J.M. et al., 1984, а), морфина (Kemner J.M. et al., 1984, б) и некоторых других лекарственных препаратов. По данным Плужни-кова Н.Н. и соавт. (1996), перфторан способен на длительный срок изменять кинетику некоторых эндогенных субстратов, в частности, гормонов. Шилов В.В. и соавт. (1997) показали, что перфторан влияет на токсикокинетику дихлорэтана таким образом, что снижается скорость, так называемого, "летального синтеза".
Весьма существенно, что ПФОС, в частности, ПФД взаимодействуют с ключевым ферментом монооксигеназной системы - цитохромом Р-450 в две фазы, первоначально вызывая эффект угнетения, а в последующем - индукции цитохрома Р-450 (Михайлов Г.М. и соавт., 1990; Плужников Н.Н., 1995; Софронов Г.А. и соавт., 1997). Соответственно, на фоне предварительного введения ПФОС в первую фазу метаболизм химических веществ в организме будет замедляться, а в течение второй фазы, напротив, возрастать. Очевидно, что в первую фазу фармакологическая активность липофильных лекарственных средств, а также токсичность ядов будет резко увеличиваться, а во вторую фазу - значительно снижаться.
Несмотря на уже упоминавшуюся теоретическую и практическую значимость обозначившейся проблемы, систематических исследований фарма-
кокинетики лекарственных средств и токсикокинетики ядов на фоне применения перфторана в достаточном объеме не проводилось. В связи с этим целью настоящей работы стало изучение влияния перфторана на токси-ко- и фармакокинетику некоторых физиологически активных препаратов -токсичных химических веществ и лекарственных средств.
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие основные научные задачи:
- отобрать физиологически активные вещества (ФАВ), отличающиеся по механизмам действия, физико-химическим свойствам, путям детоксика-ции и элиминации, для проведения фармако- и токсикокинетических исследований;
- определить параметры токсико- и фармакокинетики выбранных ФАВ при разных путях их введения в организм;
- оценить влияние перфторана на кинетические константы и параметры ФАВ в условиях варьирования сроков и путей их введения;
- провести анализ возможной модификации токсико- и фармакокинетики исследованных препаратов в присутствии перфторана.
В процессе выполнения настоящего исследования был получен ряд новых научных данных. Так, было установлено, что перфторан оказывает существенное влияние на токсикокинетику спиртов - метанола и этанола, а также фармакокинетику лекарственных препаратов - ампициллина, амитриптилина, сибазона. Характер модифицирующих эффектов перфторана зависит от срока введения эмульсии (до, после, одновременно с каким-либо из изучавшихся веществ) и способов ее введения в организм (внутривенно или внутрижелудочно). Способность перфторана модифицировать кинетику лекарственных препаратов и токсичных веществ следует считать экспериментально доказанным новым научным фактом.
Теоретическая ценность проведенного исследования заключается в разработке адекватных экспериментальных моделей для оценки эффектов перфторана на фармако- и токсикокинетику ФАВ. Установленные в
работе факты изменения кинетики лекарственных и токсичных веществ в организме животных под влиянием перфторана представляют собой дополнительную аргументацию относительно способности ПФОС модифицировать процессы всасывания, распределения и элиминации ксенобиотиков в организме.
Практическая значимость работы заключается в доказательстве способности перфторана оказывать существенное воздействие на токсикокинетику этилового и метилового спиртов, а также на фармакокине-тику некоторых лекарственных средств — амитриптилина, сибазона и ампициллина. Полученные в результате проведенного исследования научные данные должны учитываться в клинической практике при включении перфторана в схемы инфузионно-трансфузионной терапии различных патологических состояний. Разработанные экспериментальные модели, а также компьютерная программа математического анализа фармакокинетического процесса могут использоваться при изучении модифицирующих эффектов перфторана на токсикокинетику ядов и фармакокинетику лекарственных веществ.
На защиту выносятся следующие о с н о в н ы е научные положения:
1. Перфторан оказывает существенное влияние на токсикокинетику ядов и фармакокинетику лекарственных средств.
2. Характер влияния перфторана на токсико- и фармакокинетику ФАВ зависит от свойств ксенобиотика и путей введения в организм как самого ФАВ, так и перфторана.
3. Степень влияния перфторана на кинетику физиологически активных соединений в значительной мере зависит от последовательности и сроков введения ФАВ и перфторана относительно друг друга. Апробация и внедрение результатов работы. Основные результаты диссертационного исследования доложены на Всеармейской и Всероссийской научных конференциях "Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медици-
не" (Санкт-Петербург, 1999; 2001), Российской научной конференции "Пер-фторуглеродные соединения в экспериментальной и клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2004), на заседании Ученого совета НИЛ и НИЦ Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе одна статья опубликована в журнале «Вестник Российской Военно-медицинской академии», входящем в Перечень изданий, определенных ВАК РФ.
Данные, полученные в настоящем исследовании, используются в научной работе НИЛ перфторуглеродов, научной работе и в учебном процессе кафедр военной токсикологии и медицинской защиты и военно-полевой терапии Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, результатов экспериментальных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц и иллюстрирована 8 рисунками. Библиография включает 166 работ отечественных и 51 работу зарубежных авторов.
ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
ПЕРФТОРУГЛЕРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ИХ СПОСОБНОСТЬ
ВЛИЯТЬ НА ХЕМОБИОКИНЕТИКУ КСЕНОБИОТИКОВ
(Обзор литературы)
1.1. Свойства перфторуглеродных соединений и их кинетика в организме млекопитающих
Актуальной задачей трансфузиологии на протяжении почти 40 лет является поиск искусственных кровезаменителей, способных не только восполнять утерянный объем циркулирующей крови, но и хотя бы частично компенсировать ее способность транспортировать газы. В настоящее время разработка кровезаменителей-переносчиков кислорода интенсивно ведется по двум направлениям - создание растворов модифицированного гемоглобина и эмульсий на основе ПФОС (Софронов Г.А. и соавт., 2000, 2002; Riess J.G., 2001; Sarteschi L.M., 2001). В России итогом первого явилось создание Российским НИИ гематологии и трансфузиологии МЗ РФ и Институтом высокомолекулярных соединений РАН (Санкт-Петербург) нового препарата на основе полимеризованного гемоглобина человека - геленпола, который успешно прошел клинические испытания и в декабре 1998 г. Минздравом России разрешен к медицинскому применению и промышленному выпуску.
Отечественный препарат перфторан является единственным в мире кровезаменителем на основе перфторуглеродов (ПФУ), разрешенным для медицинского применения (Иваницкий Г.Р., 2001; Sarteschi L.M. et al, 2001). Перфторан был создан в 1984 г. в Институте теоретической и экспериментальной биофизики АН СССР под руководством Г.Р. Иваницкого и Ф.Ф. Белоярцева. После успешного проведения доклинических испытаний и трех фаз клинических исследований, выполненных на 947 больных (Маевский Е.И. и соавт., 2001; Moroz V.V. et al., 2002), перфторан используется как свободный
от всех инфекций и не требующий групповой совместимости кровезаменитель. Промышленное производство препарата перфторан началось в 1997 г.
ПФУ — это полностью фторированные соединения углерода. Их отличительными особенностями являются полная химическая инертность (благодаря большой прочности С—F связи) и способность к растворению больших объемов газов (Михайлова Л.Г., 1974; Сидляров Д.П. с соавт., 1983; Воробьев СИ. и соавт., 1998; Иваницкий Г.Р., 2001; Spahn D.R. et al., 1994; Ohyanagi H., 1995; Riess J.G., 2001) вследствие очень слабых межмолекулярных взаимодействий. Чистые ПФУ растворяют до 50 об.% кислорода и до 200 об.% углекислого газа. В настоящее время синтезировано множество ПФОС - от твердых до газообразных. Однако для медицинских целей используются лишь некоторые из них; основные физико-химические характеристики широко применяемых ПФУ представлены в таблице 1.1.
Показано, что в чистом виде препараты ПФОС не могут быть использованы в качестве кровезаменителей, так как слабо растворимы в воде и обладают высокой плотностью и вязкостью (Geyer R.P., 1970; Nose Y. et al., 1970). Для внутривенного введения препараты фторуглеродов диспергируются с использованием поверхностно-активных веществ (ПАВ) до образования тонкодисперсных эмульсий (Розенберг Г.Я., Макаров К.Н., 1985). В качестве ПАВ наибольшее распространение в трансфузиологии получили природные фосфолипиды (яичного желтка и соевого масла) и блок-сополимер оксидов этилена и пропилена (западное торговое название «Плюроник F-68», отечественное - «Проксанол-268», Иваницкий Г.Р., Воробьев СИ., 1993; Riess J.G., 2001). Частицы эмульсий ПФОС имеют структуру двухслойного шара - в центре ПФОС-ядро, в котором растворяются газы крови, на поверхности - тонкий слой эмульгатора (Кузнецова И.Н. и соавт., 1988; Капцов В.В., 1997). Показано, что помимо частиц эмульсии ПФОС препарат перфторан содержит большое число сферических мицеллярных частиц ПАВ (Вазина А.А. и соавт., 2004).
Таблица 1.1
Физико-химические свойства ПФУ, составляющих основу медицинских препаратов (Riess J.G., 1995)
Свойства Название ПФУ и их химическая формула
ПФД CioFig (перфтордекалин) ПФТПА C8F21N (перфтортри-пропиламин) ПФТБА C12F27N (перфтортри-бутиламин) ПФМЦП Ci2F23N (перфторметил-циклогексил-пиперидин) ПФОБ C8F17Br (перфтороктил-бромид)
Молекулярная масса 462 521 671 595 499
Температура кипения, °С 142 131 178 168 143
Давление насыщенных паров при t° 37°C мм рт. ст. 12,7 18 1,1 2 10,5
Растворимость в воде, нМ/л, 37°С 9,9 2,8 - 11 5,1
Критическая температура растворения в гексане, °С 22 44 61 40 -20
Растворимость кислорода/углекислого газа, об. %,37°С 40/190 45/166 39/152 40/150 50/210
Период полувыведения, Ti/2, сут 7 65 900 90 4
Установлено, что в организме млекопитающих ПФОС не подвергаются метаболизму и выводятся в химически неизмененном виде (Clark L.C., 1970; Yokoyama К. et al., 1978; Flaim S.F. et al., 1994; Склифас А.Н., 1980), за исключением перфтороктилбромида, который метаболизируется микросомаль-ными монооксигеназами с выделением атома брома (Образцов В.В. и соавт., 1993, а). Основной путь элиминации (80-90% от поступившей в организм дозы) - легочный (Апросин Ю.Д. и соавт., 1983, б; Иваницкий Г.Р., 2001; Riess J.G., 2001). ПФОС, кумулированные в гепатоцитах, частично выводятся с желчью через желудочно-кишечный тракт. При этом обратного всасывания из кишечника не происходит (Апросин Ю.Д. и соавт., 1983, б). Около 1-2% ПФУ выделяется через кожу (Yokoyama К. et al., 1975).
Исследования, проведенные на разных видах лабораторных животных, показали общий характер кинетики различных ПФОС (Moore R.E. et al., 1978; Flaim S.F., 1994; Henry C.J. et al., 1994; Апросин Ю.Д. и соавт., 1983, а; Маевский Е.И. и соавт., 1983; Голубев A.M., 1993; Крылов Н.Л. и соавт., 2001). После введения эмульсии ПФОС в кровеносное русло одновременно происходят следующие процессы: элиминация ПФУ с выдыхаемым воздухом через легкие (в течение 3-5 дней таким образом выводится до 40 % ПФУ) и захват частиц ПФОС макрофагами крови с последующим их депонированием в органах ретикулоэндотелиальной системы - селезенке, печени, лимфатических узлах и костном мозге. Цитоплазма макрофагов, захвативших ПФОС (перфторофагов), становится сильно вакуолизированной (Голубев A.M. и соавт., 1993; Иваницкий Г.Р., 2001; Крылов Н.Л. и соавт., 2001). В органах пер-фторофаги образуют небольшие скопления - гранулемы - из которых ПФОС в виде растворенного газа постепенно мигрируют через клеточные мембраны в кровеносные сосуды со скоростью, зависящей от их структуры (наличия ге-тероатомов) и липофильности (Розенберг Г.Я., Макаров К.Н., 1985). По кровотоку ПФУ доставляются липопротеинами в легкие и покидают организм. Данные морфологических исследований показали, что кумуляция ПФОС в органах носит преходящий характер и не сопровождается деструктивными,
дистрофическими и другими патоморфологическими изменениями (Branca D. et al., 1992; Логинова Л.Н. и соавт., 1993; Седова Л.А. и соавт., 1993). Формирующиеся при введении ПФОС гранулемы постепенно уменьшаются в размерах и замещаются паренхиматозными элементами без развития остаточного склероза (Голубев A.M. и соавт., 1993). Экспериментальные исследования по изучению общетоксического действия перфторана при многократных ин-фузиях выявили, что введение препарата вызывало определенные изменения со стороны показателей, характеризующих функции печени и почек. Однако эти изменения не оказывали существенного влияния на общее клиническое состояние животных и являлись обратимыми (Рыбалкин СП. и соавт., 2003).
Помимо макрофагов значительная часть ПФУ распределяется в липи-дах жировых депо организма (Иваницкий Г.Р., 2001).
В зависимости от способа введения эмульсии характер распределения ПФОС в организме животных заметно меняется. Так, при внутрибрюшинном введении в течение первой недели перфторофаги выявляются в легких. Накопления ПФУ в селезенке, печени и костном мозге не происходит. По-видимому, это объясняется тем, что миграция ПФОС при данном способе введения происходит с током лимфы, в кровеносное русло они практически не попадают (Крылов Н.Л. и соавт., 2001).
Отмечено, что при наружном применении ПФД для лечения открытых ран различной этиологии всасывания фторуглерода в кровь также не проис- ходит (Осипов А.П. и соавт., 2001).
Длительность циркуляции эмульсий ПФОС в кровотоке зависит от вида животного, природы ПФОС и типа эмульгатора, размера частиц и объема введенной эмульсии. Скорость элиминации грубодисперсной эмульсии (0,2-0,3 мкм) почти в 2 раза выше, чем тонкодисперсной (Сидляров Д.П. и соавт., 1983). Эмульсии, стабилизированные природными эмульгаторами, выводятся быстрее (Naito R. et al., 1978). Период полувыведения эмульсии Флуозол ДА после внутривенного введения в дозе 4 г/кг крысам, собакам или кроликам составляет 13, 25 и 29 ч соответственно (Riess J.G., 2001). Время циркуляции
перфторана в кровеносном русле экспериментальных животных даже при введении больших доз (замещение 50-60% объема циркулирующей крови) не превышает 3 суток (Воробьев СИ. и соавт., 1998; Крылов Н.Л. и соавт., 2001). После внутривенного введения 6-8 мл/кг перфторана больным через 24 ч в кровотоке циркулирует около 30%, через 48 ч - 13%, через 120 ч - 1% перфторана (Мороз В.В. и соавт., 1995).
Установлено, что ПАВ покидают сосудистое русло значительно быстрее самих ПФОС (Okamoto H. et al., 1975; Воробьев СИ. и соавт., 1993). При этом эмульсия продолжает циркулировать в диспергированном состоянии (Naito R. et al., 1978), так как в крови происходит замена проксанола на поверхности частиц на белки и фосфолипиды плазмы (Sloviter H.A. et al., 1983; Терешина Е.В., Доронина Н.Н., 1992; Путятина Т.К., 1992). Проксанол выводится из организма почками в течение суток, период выведения его достаточно короткий - 2-4 часа (Воробьев СИ. и соавт., 1998; Sarteschi L.M. et al., 2001).
Установлено, что между скоростью выведения ПФОС и стабильностью эмульсий на их основе существует обратная зависимость (Розенберг Г.Я., Макаров К.Н., 1985). Поэтому для повышения стабильности эмульсии, а также для достижения оптимального соотношения между длительностью циркуляции частиц эмульсии в кровяном русле и скоростью выведения препарата из тканей, в рецептуре ПФУ-эмульсий часто используется одновременно два ПФОС. При этом также устраняются некоторые негативные явления, вызванные нестабильным ПФОС. Так, испарение липофильного ПФД с поверхности легочных альвеол приводит к "вспениванию" мембран и уже в дозе 2-4 г/кг к гибели животных (Склифас А.Н. и соавт., 1993). Добавление в состав эмульсии перфторана более стабильного и медленно выводящегося ПФМЦП полностью снимает этот эффект. Различные ПФОС в составе двухкомпо-нентных эмульсий выводятся из органов экспериментальных животных с неодинаковой скоростью. Так, после введения животным больших доз перфторана в результате замены 50-60 % объема циркулирующей крови ПФД поки-
дает органы (печень и селезенку) в течение 2 месяцев, ПФМЦП выводится в течение 6-8 месяцев (Крылов Н.Л. и соавт., 2001).
Исследования кинетики ПФОС в организме экспериментальных животных при многократных введениях показали, что аккумулированные в органах и введенные повторно фторуглероды оказывают взаимное существенное влияние как на процессы распределения в организме, так и на механизмы выведения. Так, присутствие в органах ПФМЦП способствует ускоренному перераспределению из крови в органы повторно введенных ПФОС (Скли-фас А.Н. и соавт., 1998).
Токсичность эмульсий ПФУ определяется преимущественно размером частиц и присутствием ПАВ. Установлено, что при увеличении доли крупных частиц (со средним диаметром более 0,4 мкм) с 3 до 10 % средняя смер-тальная доза (ЛД50) уменьшается с 27 г/кг до 12,3 г/кг (Fujila T. et al, 1971). Токсичность эмульгаторов проявляется в их способности активировать систему комплемента (Vercellotti G.M. et al., 1982). Однако эмульсия перфторан практически ареактогенна благодаря совершенствованию технологий получения (Воробьев СИ. и соавт., 1994). ЛД50 перфторана составляет 130 мл/кг (35,3 г/кг в пересчете на ПФОС). Для сравнения - токсичность реополиглю-кина, широко применяемого в клинике кровезаменителя на основе декстрана, составляет 15,3 г/кг (Воробьев СИ. и соавт., 1998).
Исследования последних лет свидетельствуют о том, что ПФУ покидают организм человека с иной скоростью, возможно, быстрее, чем организм мелких лабораторных животных (Крылов Н.Л. и соавт., 2001). Так, патомор-фологические исследования органов больных, умерших от различных заболеваний, которым прижизненно вводили перфторан, показали, что внутривенное введение эмульсии приводит к образованию макрофагальных гранулем только в легких в течение первой недели после введения, в остальных органах перфторофаги выявлены не были.
На начальных этапах биомедицинских исследований ПФОС считалось, что химически инертные фторуглероды, помимо участия в переносе газов
Список литературы
Цена, в рублях:
(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)
1425
Скачать бесплатно
23381.doc
Найти готовую работу
ЗАКАЗАТЬ
Обратная
связь:
Связаться
Вход для партнеров
Регистрация
Восстановить доступ
Материал для курсовых и дипломных работ
29.04.24
Результаты оценки психологических детерминант гражданской идентичности учащихся старших классов
29.04.24
Программа формирования гражданской идентичности старшеклассников
29.04.24
Психологические основания для разработки программы формирования гражданской идентичности старшеклассников
Архив материала для курсовых и дипломных работ
Ссылки:
Счетчики:
© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.